基于mPD1和mIL-15重组蛋白靶向肿瘤、提高抗肿瘤免疫的策略

发布时间：2021-06-13 16:25

　　肿瘤微环境的靶向治疗已取得突破性的研究进展并被应用于临床,包括直接使用抗体靶向和封闭免疫学相关信号通路,或者将抗体与其它功能蛋白或片段融合表达,进行靶向治疗。此外,细胞因子治疗对肿瘤微环境中相关免疫细胞信号通路的激活发挥着重要的作用。本课题聚焦于免疫检查点分子和细胞因子,设计并表达mPD1（mouse programmed death-1）分子胞外段和mIL-15（mouse interleukin-15）功能片段的融合蛋白。该融合蛋白将以mPD1区段为弹头,通过靶向肿瘤细胞表面的mPD-L1（mouse programmed death ligand-1）分子,引导mIL-15进入肿瘤微环境中并发挥其生物学功能。在重组质粒设计时,分别在N段加上分泌蛋白VEGFA的信号肽,用来引导融合蛋白分泌;两个蛋白之间加上（GGGGS）₃的linker用来防止两个蛋白对彼此正确折叠的影响;C端加上His-tag标签,用来纯化融合蛋白。本论文主要包括以下三部分研究内容:（1）利用分子克隆技术,包括双酶切、PCR、无缝克隆等技术构建重组质粒Migr1-mPD1-mIL-15,经过... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海巴斯德研究所)上海市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

肿瘤细胞通过PD-L1与PD1分子的结合来防止被T细胞杀伤

基于mPD1和mIL-15重组蛋白靶向肿瘤、提高抗肿瘤免疫的策略30/66abcSignalpeptide3为不同亚克隆产物的琼脂糖凝胶电泳结果，符合预期。293T细胞是过表达真核生物蛋白的快捷方式之一，通过瞬时转染可以短时间内获得蛋白。鉴于本课题融合蛋白的组成来源于真核生物，且重组质粒上含引导分泌的信号肽部分，所以采用此表达策略。表达载体Migr1上含GFP蛋白标签，如图4分别转染重组质粒，空载体和不转染任何质粒，48小时后检测GFP蛋白的表达水平从而评价转染效率。由图可知相比于不转染任何质粒，转染重组abM1NFLLSWVHWTLALLLYLHHAKWSQA27SGWLLEVPNGPWRSLTFYPAWLTVSEGANATFTCSLSNWSEDLMLNWNRLSPSNQTEKQAAFCNGLSQPVQDARFQIIQLPNRHDFHMNILDTRRNDSGIYLCGAISLHPKAKIEESPGAELVVTERILETSTRYPSPSPKPEGRFQGM175GGGGSGGGGSGGGGS190NWIDVRYDLEKIESLIQSIHIDTTLYTDSDFHPSCKVTAMNCFLLELQVILHEYSNMTLNETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS304HHHHHH*PD1extracellularsectionLinkerIL-15extracellularsectionHistag图2融合蛋白氨基酸序列及模式图Figure2(a)aminoacidsequenceand(b)modelfigureoffusionprotein空载酶切载体2000bp目的基因对照1000bp空载重组质粒图3载体双酶切，目的基因PCR和重组质粒琼脂糖凝胶电泳鉴定结果Figure3agarosegelelectrophoresisidentificationresultsof(a)vectordoubledigestion,(b)PCRoftargetgeneand(c)recombinantplasmid

基于mPD1和mIL-15重组蛋白靶向肿瘤、提高抗肿瘤免疫的策略30/66abcSignalpeptide3为不同亚克隆产物的琼脂糖凝胶电泳结果，符合预期。293T细胞是过表达真核生物蛋白的快捷方式之一，通过瞬时转染可以短时间内获得蛋白。鉴于本课题融合蛋白的组成来源于真核生物，且重组质粒上含引导分泌的信号肽部分，所以采用此表达策略。表达载体Migr1上含GFP蛋白标签，如图4分别转染重组质粒，空载体和不转染任何质粒，48小时后检测GFP蛋白的表达水平从而评价转染效率。由图可知相比于不转染任何质粒，转染重组abM1NFLLSWVHWTLALLLYLHHAKWSQA27SGWLLEVPNGPWRSLTFYPAWLTVSEGANATFTCSLSNWSEDLMLNWNRLSPSNQTEKQAAFCNGLSQPVQDARFQIIQLPNRHDFHMNILDTRRNDSGIYLCGAISLHPKAKIEESPGAELVVTERILETSTRYPSPSPKPEGRFQGM175GGGGSGGGGSGGGGS190NWIDVRYDLEKIESLIQSIHIDTTLYTDSDFHPSCKVTAMNCFLLELQVILHEYSNMTLNETVRNVLYLANSTLSSNKNVAESGCKECEELEEKTFTEFLQSFIRIVQMFINTS304HHHHHH*PD1extracellularsectionLinkerIL-15extracellularsectionHistag图2融合蛋白氨基酸序列及模式图Figure2(a)aminoacidsequenceand(b)modelfigureoffusionprotein空载酶切载体2000bp目的基因对照1000bp空载重组质粒图3载体双酶切，目的基因PCR和重组质粒琼脂糖凝胶电泳鉴定结果Figure3agarosegelelectrophoresisidentificationresultsof(a)vectordoubledigestion,(b)PCRoftargetgeneand(c)recombinantplasmid


本文编号：3227886