小细胞肺癌蛋白酶体和拓扑异构酶抑制剂的耐药机制研究
发布时间：2021-06-16 06:44
(本大论文分为两个部分:蛋白酶体抑制剂与拓扑异构酶抑制剂,从两个方面、两种系统来研究小细胞肺癌耐药机制以及化疗增敏剂。)第一部分:obatoclax能增强蛋白酶体抑制剂对小细胞肺癌细胞的抗肿瘤作用蛋白酶体抑制剂（proteasome inhibitor,PIs）硼替佐米（bortezomib,BTZ）和卡非佐米（carfilzomib,CFZ）已经被临床应用于治疗血液恶性肿瘤。但是在实体肿瘤中Pis由于容易产生耐药性,所以其临床试验效果并不理想。迄今为止还没有应用于实体瘤的治疗。为了研究PIs治疗小细胞肺癌时产生耐药性的机制以及提高PIs的敏感性,本文首先通过研究两种PIs BTZ和CFZ对小细胞肺癌的杀伤作用的不同及其可能的分子机制,进而使用协同治疗手段将MCL-1抑制剂obatoclax（OBX）和PIs联合治疗小细胞肺癌。在本篇研究中,我们应用了基于质谱的蛋白组学分析发现即使硼替佐米和卡非佐米都是PIs,但是二者能诱导完全不同的蛋白组学变化,进而在小细胞肺癌细胞中影响不同的信号通路。结果显示,硼替佐米处理组比较倾向于影响参与细胞分裂和调节细胞周期的蛋白,而卡非佐米处理组能够影响磷...
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１泛素－蛋白酶体系统示意图
?第１章绪论???（ＡＳＢＴ）【〗２］。ＵＰＳ降解系统调节受体信号途径中的蛋白质水平，如控制细胞死亡和细胞??周期的蛋白质［１３＿１５］。??如图１．２所示，人２６Ｓ蛋白酶体是一个非常大的（约２．４ｍｄａ）多亚单位蛋白复合物，??由１９Ｓ的调节帽和２０Ｓ的催化核心组成，内部含有七个Ｐ亚基（ＰＩ、Ｐ２、ｐ３等），他们??负责蛋白酶体三种蛋白水解活性的催化位点。Ｐ５亚基由ＰＳＭｐ５基因编码，是硼替佐米的??分子结合靶点。硼替佐米与ＰＳＭ｜３５的结合抑制了这种蛋白酶体亚单位的糜蛋白样活性，??激活下游一系列效应通路，包括稳定１?ｋ?Ｂ抑制ＮＦｋ?Ｂ信号以及激活包括未折叠蛋白反应??在内的多种应激反应途径，最终触发细胞死亡｜１６】。??２６Ｓ?Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?Ｉ?ｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ??１９Ｓ?［?＾二?ｐｒ〇ｔｅ〇ｉｙｔｉｃｓｉｔｅｓ：??「ａｓｕｂ祕?ＩＦＮ－ｙ?ｘＪｆｊＣＭ?？?Ｃａｓｐａｓｅ－ｌｉｋｅ??２〇Ｓ?ｐ．ｓｕｂｕｍｔｓ?ＴＮＦ．ａ?Ｔｒｙｐｓｉｒｖｌｉｋｅ??—ａ－ｓ—ｔｓ?ｄ—??％Ｐ?Ｖ??图１．２?２６Ｓ蛋白酶体抑制剂的分子结构示意图ｌ１６ｌ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?２６Ｓ?ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．??由于ＵＰＳ在蛋白质转换中的作用以及肿瘤细胞更依赖ＵＰＳ，前人将蛋白酶体抑制剂??（Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，?Ｐｉｓ）应用到」肿瘤病人的治疗当中。Ｐｉｓ最初是作为在预防癌症??相关的恶疾方面的药物开发的。如图１．１所示，Ｐｉｓ的作用会影响２６Ｓ蛋白酶体识别泛素??化标记的蛋
结果??３．?１硼替佐米和卡非佐米能够体外抑制小细胞肺癌细胞的生长??为了验证Ｐｉｓ中硼替佐米和卡非佐米在小细胞肺癌中的抗肿瘤作用，我们使用６个小??细胞肺癌细胞系（Ｈ８２，?Ｈ５２６，?ＤＭＳ７９，?Ｈ１９６３，?Ｈ１％和Ｈ６９）来进行后续研宄。首先，我??们使用不同浓度的硼替佐米和卡非佐米来处理小细胞肺癌细胞系，然后测量细胞活性。从??细胞增殖实验结果中我们可以看出，小细胞肺癌细胞系对硼替佐米和卡非佐米非常敏感，??硼替佐米和卡非佐米能够在非常低的浓度下抑制小细胞肺癌细胞的生长（图３．１．１）。其??中，卡非佐米对于小细胞肺癌细胞的ＩＣ５Ｇ值比硼替佐米对于小细胞肺癌细胞的丨Ｃ５Ｑ值低??很多，这就意味着卡非佐米对小细胞肺癌细胞的杀伤作用比硼替佐米更好（图３．１．１）。??丨：■丨：動??〇■！?１?１?—?０－１—Ｉ?１?＂Ｉ?—??４?－２?０?２?４?－４－２０２４??Ｌｏｇ?｜ＢＴＺ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?｜?ｎＭ?丨ｘ＞ｇ?｜ＣＦＺ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?丨?ｎＭ??ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?Ｈ８２?Ｈ５２６?ＤＭＳ７９?ＨＩ９６３?ＨＩ９６?Ｈ６９??ＢＴＺ?ＩＣ５０（ｎＭ）?１６．２６±５．８６?１２．８２±２．７３?３２．２４±４．６３?５９．１５±６．３２?１２．２３±１．２３?１３?９１?土?１．５２??ＣＦＺ?ＩＣ５０（ｎＭ）?０．４２土０．２１?３．７２±０．７３?２０．３５±６．７１?７．６８±３．００?０．７１?±０．３５?０．２９土０．２１??图３．１．１硼替佐米与卡非佐米作用于小细胞肺癌细胞系的生长抑制曲线。??用不同浓度（ｌ〇－３
本文编号：3232582
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１泛素－蛋白酶体系统示意图
?第１章绪论???（ＡＳＢＴ）【〗２］。ＵＰＳ降解系统调节受体信号途径中的蛋白质水平，如控制细胞死亡和细胞??周期的蛋白质［１３＿１５］。??如图１．２所示，人２６Ｓ蛋白酶体是一个非常大的（约２．４ｍｄａ）多亚单位蛋白复合物，??由１９Ｓ的调节帽和２０Ｓ的催化核心组成，内部含有七个Ｐ亚基（ＰＩ、Ｐ２、ｐ３等），他们??负责蛋白酶体三种蛋白水解活性的催化位点。Ｐ５亚基由ＰＳＭｐ５基因编码，是硼替佐米的??分子结合靶点。硼替佐米与ＰＳＭ｜３５的结合抑制了这种蛋白酶体亚单位的糜蛋白样活性，??激活下游一系列效应通路，包括稳定１?ｋ?Ｂ抑制ＮＦｋ?Ｂ信号以及激活包括未折叠蛋白反应??在内的多种应激反应途径，最终触发细胞死亡｜１６】。??２６Ｓ?Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?Ｉ?ｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ??１９Ｓ?［?＾二?ｐｒ〇ｔｅ〇ｉｙｔｉｃｓｉｔｅｓ：??「ａｓｕｂ祕?ＩＦＮ－ｙ?ｘＪｆｊＣＭ?？?Ｃａｓｐａｓｅ－ｌｉｋｅ??２〇Ｓ?ｐ．ｓｕｂｕｍｔｓ?ＴＮＦ．ａ?Ｔｒｙｐｓｉｒｖｌｉｋｅ??—ａ－ｓ—ｔｓ?ｄ—??％Ｐ?Ｖ??图１．２?２６Ｓ蛋白酶体抑制剂的分子结构示意图ｌ１６ｌ。??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?２６Ｓ?ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．??由于ＵＰＳ在蛋白质转换中的作用以及肿瘤细胞更依赖ＵＰＳ，前人将蛋白酶体抑制剂??（Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ?Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，?Ｐｉｓ）应用到」肿瘤病人的治疗当中。Ｐｉｓ最初是作为在预防癌症??相关的恶疾方面的药物开发的。如图１．１所示，Ｐｉｓ的作用会影响２６Ｓ蛋白酶体识别泛素??化标记的蛋
结果??３．?１硼替佐米和卡非佐米能够体外抑制小细胞肺癌细胞的生长??为了验证Ｐｉｓ中硼替佐米和卡非佐米在小细胞肺癌中的抗肿瘤作用，我们使用６个小??细胞肺癌细胞系（Ｈ８２，?Ｈ５２６，?ＤＭＳ７９，?Ｈ１９６３，?Ｈ１％和Ｈ６９）来进行后续研宄。首先，我??们使用不同浓度的硼替佐米和卡非佐米来处理小细胞肺癌细胞系，然后测量细胞活性。从??细胞增殖实验结果中我们可以看出，小细胞肺癌细胞系对硼替佐米和卡非佐米非常敏感，??硼替佐米和卡非佐米能够在非常低的浓度下抑制小细胞肺癌细胞的生长（图３．１．１）。其??中，卡非佐米对于小细胞肺癌细胞的ＩＣ５Ｇ值比硼替佐米对于小细胞肺癌细胞的丨Ｃ５Ｑ值低??很多，这就意味着卡非佐米对小细胞肺癌细胞的杀伤作用比硼替佐米更好（图３．１．１）。??丨：■丨：動??〇■！?１?１?—?０－１—Ｉ?１?＂Ｉ?—??４?－２?０?２?４?－４－２０２４??Ｌｏｇ?｜ＢＴＺ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?｜?ｎＭ?丨ｘ＞ｇ?｜ＣＦＺ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?丨?ｎＭ??ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ?Ｈ８２?Ｈ５２６?ＤＭＳ７９?ＨＩ９６３?ＨＩ９６?Ｈ６９??ＢＴＺ?ＩＣ５０（ｎＭ）?１６．２６±５．８６?１２．８２±２．７３?３２．２４±４．６３?５９．１５±６．３２?１２．２３±１．２３?１３?９１?土?１．５２??ＣＦＺ?ＩＣ５０（ｎＭ）?０．４２土０．２１?３．７２±０．７３?２０．３５±６．７１?７．６８±３．００?０．７１?±０．３５?０．２９土０．２１??图３．１．１硼替佐米与卡非佐米作用于小细胞肺癌细胞系的生长抑制曲线。??用不同浓度（ｌ〇－３
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