鉴定GJB2作为胰腺癌标志物及机制研究

发布时间：2021-06-17 20:50

　　目的:胰腺癌是世界范围内恶性度最高的肿瘤之一,胰腺癌患者的五年生存率小于6%,每年胰腺癌患者的死亡人数高居全球肿瘤死亡的第八位,对人类的生命和健康带了极大的威胁。其发病率逐年增高并且呈现年轻化的趋势。由于胰腺是乏血供器官,所以胰腺癌对放、化疗均不敏感,手术是治疗胰腺癌的最佳方式。但是由于胰腺癌发病隐匿、早期就发生侵袭、转移,所以大部分患者发现时就失去了手术机会。胰腺癌因其高度恶性,目前缺乏有效的早期诊断、预后等生物标志物。胰腺癌的发生、发展是一个多阶段、多基因改变累积的长期过程。目前,其确切的发病机制仍然不清楚。随着基因诊断技术和分子生物学的快速发展,在目前已知的和胰腺癌发生密切相关的基因以外,近年来又发现了一些与胰腺癌关系密切的基因,这些基因在胰腺癌中所扮演的角色越来越收到人们的重视。研究方法:1、利用生物信息学整合得到总样本数大于120例,具有良好代表性的胰腺癌及癌旁组织测序数据。明确在胰腺癌及癌旁组织中差异表达的基因,对这些差异基因所富集的功能及通路进行注释,得到其相互作用关系网络。确定差异基因与胰腺癌诊断及预后的相关性,结合生物信息学分析及免疫组化分析,确定出数个与胰腺癌预后高... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:鉴定COL11A1,GJB2和CTRL作为胰腺癌标志物
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 生物信息学研究
            2.1.1 GEO数据集的筛选
            2.1.2 胰腺癌测序数据筛选及整合
            2.1.3 整合测序数据验证
            2.1.4 差异表达基因筛选
            2.1.5 差异基因功能注释
            2.1.6 差异基因诊断效能分析
            2.1.7 TCGA数据库验证及生存分析
        2.2 免疫组化研究
            2.2.1 主要试剂和仪器
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 实验方法
            2.2.4 免疫组织化学结果判定
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 从整合的数据集中筛选出差异表达基因
        3.2 差异表达基因的GO分析和KEGG分析
        3.3 DEGs的 PPI分析
        3.4 前五位上调和下调表达的基因的临床价值
        3.5 免疫组化(IHC)对COL11A1,GJB2和CTRL在胰腺癌组织和癌旁组织的表达进行验证
    4 讨论
    5 结论
第二部分:GJB2 基因对胰腺癌生物学行为的影响及机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 细胞冻存
            2.3.3 细胞复苏
            2.3.4 细胞计数
            2.3.5 提取细胞蛋白
            2.3.6 Western-blot
            2.3.7 shRNA转染
            2.3.8 筛选沉默基因和转染阴性对照载体的稳定表达细胞株
            2.3.9 Western blot检测慢病毒感染目的细胞后GJB2蛋白表达
        2.4 细胞增殖实验(CCK-8法)
        2.5 划痕实验
        2.6 Transwell分析
            2.6.1 Transwell迁移实验
            2.6.2 Transwell侵袭实验
        2.7 转染后上皮-间质指标变化检测
            2.7.1 Western blot
            2.7.2 免疫荧光实验
    3 实验结果
        3.1 慢病毒转染结胰腺癌细胞的效果
        3.2 基因敲减效率检测
        3.3 沉默GJB2基因对胰腺癌细胞增殖的影响
        3.4 敲减GJB2对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响
        3.5 敲减GJB2 对胰腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响
        3.6 敲减GJB2对Wnt/beta-catenin信号通路和MAPK通路的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述 生物信息学分析方法及分析工具在癌症研究中的应用进展
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Emerging role of the KRAS-PDK1 axis in pancreatic cancer[J]. Riccardo Ferro,Marco Falasca.  World Journal of Gastroenterology. 2014(31)



本文编号：3235899