长链非编码RNA LINC00909在脑胶质瘤中的作用与机制研究
发布时间：2021-06-23 01:32
胶质瘤是中枢神经系统（CNS）最常见、侵袭性最高的原发性恶性肿瘤,具有复发率高、致死率高和治愈率低等特点,目前仍然是神经外科领域的一项重大挑战。尽管近年来在外科手术、放疗、化疗、分子靶向治疗及肿瘤电场治疗（TTFields）等方面都取得了一定的进展,但是胶质瘤患者的总体预后仍不理想。尤其是胶质母细胞瘤患者,中位生存期仅约14个月。胶质瘤的发病机制不清给患者的诊疗带来了巨大的障碍。因此,深入探索胶质瘤发生、发展的分子生物学机制,寻找特异性的治疗靶点成为当今神经外科领域研究的焦点。长链非编码RNA（lnc RNA）是一类长度大于200个核苷酸、无蛋白编码功能的RNA,能够在转录、转录后、翻译、翻译后等多个水平参与对靶基因的调控,进而发挥重要的生物学功能。Lnc RNA的异常表达可以影响胶质瘤的形成与进展,并且可以作为潜在的胶质瘤诊断及判断患者预后的分子标志物和治疗靶点。尽管目前已经确定了一些在胶质瘤中差异表达的lnc RNAs,并对其进行了较为深入的科学研究,但绝大多数lnc RNAs在胶质瘤发生、发展过程中的生物学功能和分子机制尚不明确。通过对课题组前期完成的胶质瘤基因芯片数据进行分析及...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LINC00909在10例正常脑组织（NBT）、28例低级别胶质瘤（LGG）和74例高级别HGG*:P<0.05**:P<0.01
海军军医大学硕士学位论文-16-Tumorsize(cm)<557(55.9%)30(58.8%)27(52.9%)0.690≥545(44.1%)21(41.2%)24(47.1%)WHON(%)I8(7.8%)1(2.0%)7(13.7%)0.001II20(19.6%)4(7.8%)16(31.4%)III10(9.8%)6(11.8%)4(7.8%)IV64(62.7%)40(78.4%)24(47.1%)GradeN(%)LGG(WHOI~II)28(27.5%)5(9.8%)23(45.1%)<0.001HGG(WHOIII~IV)74(72.5%)46(90.2%)28(54.9%)三、LINC00909的表达水平与患者生存预后的相关性结合患者的随访资料，采用Log-rank检验分析LINC00909的表达水平与患者总生存时间的相关性，并绘制Kaplan-Meier生存曲线（图1.2）。结果表明：LINC00909的表达水平与患者的总生存时间呈负相关，P<0.0001，差异具有统计学意义（图1.2A）；在低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组中，LINC00909的表达水平与患者的总生存时间也呈负相关，P值分别为0.0097和0.0066，差异具有统计学意义（图1.2B、C）。图1.2Kaplan–Meier生存曲线及Log-rank检验分析LINC00909的表达水平与患者总生存时间的相关性。将本研究中可能影响患者生存预后的危险因素纳入单因素分析，结果表明：患者的年龄、肿瘤的WHO分级和LINC00909的表达水平与患者的生存预后具有相关性，P值均小于0.05，差异具有统计学意义。将单因素COX回归分析结果中P值小于0.05的变量纳入多因素COX回归分析模型中，分析结果表明：LINC00909的表达水平和肿瘤的WHO分级是影响患者生存预后的独立危险因素，P值分别为P=0.003和P<0.001（表1.7）。
海军军医大学硕士学位论文-26-使用ImageJ软件分析蛋白条带灰度值。统计数值用均数±标准差表示，多组间差异比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Tukey法或Dunnett法，两组间的差异比较采用独立样本t检验，P值小于0.05认为差异具有统计学意义。实验结果一、LINC00909在不同胶质瘤细胞系和人星形胶质细胞系NHA中的表达情况通过qRT-PCR检测LINC00909在胶质瘤细胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形胶质细胞系NHA中的相对表达量，结果表明：LINC00909在U251、SHG44、A172和U87MG中的表达水平显著高于NHA细胞，P值均小于0.01，差异具有统计学意义（图2.1）。图2.1qRT-PCR检测LINC00909在胶质瘤细胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形胶质细胞系NHA中的相对表达量（**:P<0.01）。二、小干扰RNA转染胶质瘤细胞系U87MG和U251的干扰效率将上述实验中LINC00909表达水平相对较高的胶质瘤细胞系U87MG和U251作为实验对象，使用Lipofectamine3000试剂将3条小干扰RNA（si-LINC-1、si-LINC-2、si-LINC-3）和阴性对照序列（si-NC）转染靶细胞，通过qRT-PCR检测小干扰RNA的干扰效率。实验结果表明：3条siRNA均能显著抑制LINC00909在U87MG和U251中的表达，其中si-LINC-1的干扰效率最高（图2.2）。因此，我们选择si-LINC-1转染U87MG和U251细胞进行后续的体外细胞功能实验。
本文编号：3243946
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LINC00909在10例正常脑组织（NBT）、28例低级别胶质瘤（LGG）和74例高级别HGG*:P<0.05**:P<0.01
海军军医大学硕士学位论文-16-Tumorsize(cm)<557(55.9%)30(58.8%)27(52.9%)0.690≥545(44.1%)21(41.2%)24(47.1%)WHON(%)I8(7.8%)1(2.0%)7(13.7%)0.001II20(19.6%)4(7.8%)16(31.4%)III10(9.8%)6(11.8%)4(7.8%)IV64(62.7%)40(78.4%)24(47.1%)GradeN(%)LGG(WHOI~II)28(27.5%)5(9.8%)23(45.1%)<0.001HGG(WHOIII~IV)74(72.5%)46(90.2%)28(54.9%)三、LINC00909的表达水平与患者生存预后的相关性结合患者的随访资料，采用Log-rank检验分析LINC00909的表达水平与患者总生存时间的相关性，并绘制Kaplan-Meier生存曲线（图1.2）。结果表明：LINC00909的表达水平与患者的总生存时间呈负相关，P<0.0001，差异具有统计学意义（图1.2A）；在低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组中，LINC00909的表达水平与患者的总生存时间也呈负相关，P值分别为0.0097和0.0066，差异具有统计学意义（图1.2B、C）。图1.2Kaplan–Meier生存曲线及Log-rank检验分析LINC00909的表达水平与患者总生存时间的相关性。将本研究中可能影响患者生存预后的危险因素纳入单因素分析，结果表明：患者的年龄、肿瘤的WHO分级和LINC00909的表达水平与患者的生存预后具有相关性，P值均小于0.05，差异具有统计学意义。将单因素COX回归分析结果中P值小于0.05的变量纳入多因素COX回归分析模型中，分析结果表明：LINC00909的表达水平和肿瘤的WHO分级是影响患者生存预后的独立危险因素，P值分别为P=0.003和P<0.001（表1.7）。
海军军医大学硕士学位论文-26-使用ImageJ软件分析蛋白条带灰度值。统计数值用均数±标准差表示，多组间差异比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Tukey法或Dunnett法，两组间的差异比较采用独立样本t检验，P值小于0.05认为差异具有统计学意义。实验结果一、LINC00909在不同胶质瘤细胞系和人星形胶质细胞系NHA中的表达情况通过qRT-PCR检测LINC00909在胶质瘤细胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形胶质细胞系NHA中的相对表达量，结果表明：LINC00909在U251、SHG44、A172和U87MG中的表达水平显著高于NHA细胞，P值均小于0.01，差异具有统计学意义（图2.1）。图2.1qRT-PCR检测LINC00909在胶质瘤细胞系U118MG、U251、SHG44、A172、U87MG和人星形胶质细胞系NHA中的相对表达量（**:P<0.01）。二、小干扰RNA转染胶质瘤细胞系U87MG和U251的干扰效率将上述实验中LINC00909表达水平相对较高的胶质瘤细胞系U87MG和U251作为实验对象，使用Lipofectamine3000试剂将3条小干扰RNA（si-LINC-1、si-LINC-2、si-LINC-3）和阴性对照序列（si-NC）转染靶细胞，通过qRT-PCR检测小干扰RNA的干扰效率。实验结果表明：3条siRNA均能显著抑制LINC00909在U87MG和U251中的表达，其中si-LINC-1的干扰效率最高（图2.2）。因此，我们选择si-LINC-1转染U87MG和U251细胞进行后续的体外细胞功能实验。
本文编号：3243946
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