口腔癌细胞来源外泌体对正常口腔黏膜成纤维细胞生物学作用的研究
发布时间：2021-06-27 06:11
背景:口腔癌是口腔黏膜发生的最常见的恶性肿瘤,其特点是浸润性广、进程快、预后较差,5年存活率只有50%55%。肿瘤的进展是由上皮和间质的相互作用,构成的肿瘤与宿主界面微环境决定的。癌相关成纤维细胞（CAFs）占肿瘤微生态环境的主要部分,它能够促使口腔癌的侵袭和转移,但其来源仍存在争论。有研究表明肿瘤细胞的调控使成纤维细胞被激活成为CAFs,但作用机制不明。近年来研究表明,肿瘤细胞可分泌外泌体,其中含有大量可促进其生长、侵袭和转移的蛋白质、RNA和脂质,细胞通过释放外泌体影响受体细胞的状态和功能。关于胰腺癌的相关研究,结果表明,胰腺癌细胞分泌的外泌体可以将癌细胞中的miR-155传递给成纤维细胞,诱导其活化为CAFs。但对于口腔癌细胞来源外泌体（Cal27-exo）在成纤维细胞活化中发挥的作用尚未见报道。目的:本研究通过将Cal27-exo与正常口腔黏膜成纤维细胞（NOMFs）共培养,检测NOMFs对Cal27-exo的摄取情况,并测定与Cal27-exo共培养后NOMFs（NOMFs+Cal27-exo）的增殖和迁移能力以及相关蛋白的表达。探讨Cal27-exo对...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NOMFs原代培养
NOMFs的透射电镜
兰州大学硕士学位论文口腔癌细胞来源外泌体对口腔黏膜成纤维细胞生物学作用的研究92.2.3NOMFs的细胞来源鉴定取第3代NOMFs培养进行免疫荧光染色（图3-4），荧光显微镜下观察显示：细胞内波形蛋白染色为阳性（图3），角蛋白染色为阴性（图4），说明培养获得的细胞为中胚层细胞，来源于间充质，而非上皮。图3NOMFs的波形蛋白荧光染色。波形蛋白经抗波形蛋白抗体和与Cy3结合的山羊抗小鼠IgG染色，呈阳性(红色)。细胞核用DAPI染色(蓝色)。比例尺为200μm。图4NOMFs的角蛋白荧光染色。细胞角蛋白用抗广谱细胞角蛋白抗体和预吸附Cy3的山羊抗兔IgGH&L染色，呈阴性，细胞核用DAPI染色(蓝色)。比例尺为200μm。2.3讨论成纤维细胞是结缔组织中产生和维持细胞外基质（ECM）的一组复杂的多功能细胞[52]，参与结缔组织的许多细胞过程，它们广泛存在于身体的每个组织和器官中[53]。成纤维细胞不仅可以产生细胞外基质（如不同的胶原类型）和细胞基质（如糖胺聚糖），在健康和疾病中也发挥着不同的作用，是炎症、血管生成、癌症以及生理和病理组织纤维化的中枢介质[54]。在疾病发生发展过程中，许多不同类型的细胞，尤其是成纤维细胞，被激活并改变其表型。因此在体外研究不同疾病的进程，前提就是成熟的培养出成纤维细胞。原代培养成纤维细胞最基本方法是组织块培养法和酶消化法。虽然两种方法
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔鳞癌对牙龈成纤维细胞转化为肿瘤相关成纤维细胞的影响[J]. 孟琳,王丹丹,布文奂,李杏,辛颖,王璐,孙宏晨. 口腔生物医学. 2017(03)
[2]Expression of fibroblast activation protein in human pancreatic adenocarcinoma and its clinicopathological significance[J]. Min Shi, Dang-Hui Yu, Ying Chen, Chen-Yan Zhao, Jing Zhang, Qing-Hua Liu, Can-Rong Ni, Ming-Hua Zhu, Department of Pathology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China. World Journal of Gastroenterology. 2012(08)
[3]卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异[J]. 王晓翊,韩方,唐慧娟,王泽华. 中国妇幼保健. 2011(06)
[4]血小板衍生生长因子及其受体在人肝细胞肝癌中的表达及意义[J]. 王伟,官阳,杨木兰,张春明. 实用肿瘤杂志. 2007(03)
[5]口腔黏膜上皮细胞的培养条件[J]. 吴东红. 郑州大学学报(医学版). 2004(04)
[6]PDGF在肺鳞状细胞癌中的表达[J]. 欧阳瑶,邓飞,刘华庆. 遵义医学院学报. 2002(06)
[7]原位杂交检测胰腺癌血小板衍化生长因子及其受体的基因表达[J]. 龚涌灵,许国铭,黄伟达. 解放军医学杂志. 1998(05)
本文编号：3252300
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
NOMFs原代培养
NOMFs的透射电镜
兰州大学硕士学位论文口腔癌细胞来源外泌体对口腔黏膜成纤维细胞生物学作用的研究92.2.3NOMFs的细胞来源鉴定取第3代NOMFs培养进行免疫荧光染色（图3-4），荧光显微镜下观察显示：细胞内波形蛋白染色为阳性（图3），角蛋白染色为阴性（图4），说明培养获得的细胞为中胚层细胞，来源于间充质，而非上皮。图3NOMFs的波形蛋白荧光染色。波形蛋白经抗波形蛋白抗体和与Cy3结合的山羊抗小鼠IgG染色，呈阳性(红色)。细胞核用DAPI染色(蓝色)。比例尺为200μm。图4NOMFs的角蛋白荧光染色。细胞角蛋白用抗广谱细胞角蛋白抗体和预吸附Cy3的山羊抗兔IgGH&L染色，呈阴性，细胞核用DAPI染色(蓝色)。比例尺为200μm。2.3讨论成纤维细胞是结缔组织中产生和维持细胞外基质（ECM）的一组复杂的多功能细胞[52]，参与结缔组织的许多细胞过程，它们广泛存在于身体的每个组织和器官中[53]。成纤维细胞不仅可以产生细胞外基质（如不同的胶原类型）和细胞基质（如糖胺聚糖），在健康和疾病中也发挥着不同的作用，是炎症、血管生成、癌症以及生理和病理组织纤维化的中枢介质[54]。在疾病发生发展过程中，许多不同类型的细胞，尤其是成纤维细胞，被激活并改变其表型。因此在体外研究不同疾病的进程，前提就是成熟的培养出成纤维细胞。原代培养成纤维细胞最基本方法是组织块培养法和酶消化法。虽然两种方法
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔鳞癌对牙龈成纤维细胞转化为肿瘤相关成纤维细胞的影响[J]. 孟琳,王丹丹,布文奂,李杏,辛颖,王璐,孙宏晨. 口腔生物医学. 2017(03)
[2]Expression of fibroblast activation protein in human pancreatic adenocarcinoma and its clinicopathological significance[J]. Min Shi, Dang-Hui Yu, Ying Chen, Chen-Yan Zhao, Jing Zhang, Qing-Hua Liu, Can-Rong Ni, Ming-Hua Zhu, Department of Pathology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China. World Journal of Gastroenterology. 2012(08)
[3]卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异[J]. 王晓翊,韩方,唐慧娟,王泽华. 中国妇幼保健. 2011(06)
[4]血小板衍生生长因子及其受体在人肝细胞肝癌中的表达及意义[J]. 王伟,官阳,杨木兰,张春明. 实用肿瘤杂志. 2007(03)
[5]口腔黏膜上皮细胞的培养条件[J]. 吴东红. 郑州大学学报(医学版). 2004(04)
[6]PDGF在肺鳞状细胞癌中的表达[J]. 欧阳瑶,邓飞,刘华庆. 遵义医学院学报. 2002(06)
[7]原位杂交检测胰腺癌血小板衍化生长因子及其受体的基因表达[J]. 龚涌灵,许国铭,黄伟达. 解放军医学杂志. 1998(05)
本文编号：3252300
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