CPEB3通过干扰结直肠癌细胞与肿瘤相关巨噬细胞之间的相互作用调控肿瘤进展的机制研究
发布时间：2021-06-29 09:49
研究背景和目的细胞质多聚腺苷酸结合蛋白3（CPEB3）靶向连接mRNAs。我们的既往研究表明CPEB3与结直肠癌（CRC）患者的预后相关,但其在结直肠癌中的分子机制和调控网络仍不清楚。本课题拟通过检测CPEB3、CD86和CD163在结直肠癌组织和细胞中的表达,初步分析CPEB3与肿瘤相关巨噬细胞（TAM）标志分子的相关性,并通过一系列分子生物学实验,探究CPEB3在结直肠癌免疫微环境中的调控机制,寻找结直肠癌治疗的新靶点。研究方法1.CPEB3,CD86和CD163在结直肠癌组织和细胞中的表达和相互关系（1）在结直肠癌组织中,分别通过qRT-PCR和IHC检测CPEB3,CD86和CD163在其中的表达;（2）构建巨噬细胞和结直肠癌细胞体外共培养模型,qRT-PCR和flow cytometry检测CD86和CD163表达;Luminex assays检测TAM上清中细胞因子的表达。2.CPEB3抑制TAM分泌IL-6促进结直肠癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用（1）通过Luminex assays和ELISA实验检测TAM上清中IL-6的分泌;通过CCK8和Transwell实验检...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验检测在８２对结直肠癌组织及其癌旁组织中，ＣＰＥＢ３和ＣＤ８６?ｍＲＮＡ??表达水平并分析了结直肠癌组织中ＣＰＥＢ３与ＣＤ８６、ＣＤ８６／ＣＤ１６３的相关性
第一章ＣＰＥＢ３、ＣＤ８６和ＣＤ１６３在结直肠癌组织和细胞中的表达鉴定和相互关系??／?／Ｖ?／??ＣＰＥＢ３?來，?病＾?７２ｋｄ???：?一??ＧＡＰＤＨ?ｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?３６ｋｄ??图１－３细胞系中ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ表达水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?ｉｎ?ｖａｒｉｏｕｓ?ＣＲＣ?ｌｉｎｅｓ．??根据上述结直肠癌细胞中ＣＰＥＢ３的表达情况，我们选择ＣＰＥＢ３相对低表达??的结直肠癌细胞株ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６进行外源性过表达ＣＰＥＢ３，而对ＣＰＥＢ３相对??高表达的细胞株ＲＫＯ和ＬｏＶｏ进行内源性敲低ＣＰＥＢ３。进一步我们通过慢病毒转??染技术，构建了?ＣＰＥＢ３过表达和空载质粒慢病毒，分别感染ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６两??株细胞，构建了ＳＷ４８０－ｃｏｎｔｒｌ、ＳＷ４８０－ＣＰＥＢ３、ＨＣＴ１１６－ｃｏｎｔｒ＾ＢＨＣＴ１１６－ＣＰＥＢ３??细胞株。同时，我们使用ＣＰＥＢ３特异性ｓｈＲＮＡ和相应的对照（Ｃｏｎｔｒｌ）慢病毒感??染ＲＫＯ和ＬｏＶｏ两株细胞，构建了ＲＫＯ－ｃｏｎｔｒｌ、ＲＫ０－ｓｈＣＰＥＢ３、ＬｏＶｏ－ｃｏｎｔｒｌ和??ＬｏＶｏ－ｓｈＣＰＥＢ３细胞株。最后，我们通过ｑＲＴ－ＰＣＲ?（图?１－４Ａ）和ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ?（图??１－４Ｂ）验证ＣＰＥＢ３过表达和敲低效果。??Ａ?１２００￣｜?＊＊?ｍ｜?ｐｉ?｜?＜?１．５＊１?ｓｈＣｔｒｌ??ｉｌｌ?１?ｒ３?ＨｉｉｉＴ??Ｐ?ｌＵｔ?ｓ｜：：ｌｕｌｉ??ＳＷ４８０?ＨＣＴ１１６?ＬＯＶＯ?ＲＫＯ??Ｂ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]大肠癌筛查共识与争议[J]. 王振军,付李缘. 临床外科杂志. 2018(10)
[3]Lynch syndrome and Lynch syndrome mimics: The growing complex landscape of hereditary colon cancer[J]. John M Carethers,Elena M Stoffel. World Journal of Gastroenterology. 2015(31)
本文编号：3256223
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：118 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验检测在８２对结直肠癌组织及其癌旁组织中，ＣＰＥＢ３和ＣＤ８６?ｍＲＮＡ??表达水平并分析了结直肠癌组织中ＣＰＥＢ３与ＣＤ８６、ＣＤ８６／ＣＤ１６３的相关性
第一章ＣＰＥＢ３、ＣＤ８６和ＣＤ１６３在结直肠癌组织和细胞中的表达鉴定和相互关系??／?／Ｖ?／??ＣＰＥＢ３?來，?病＾?７２ｋｄ???：?一??ＧＡＰＤＨ?ｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?３６ｋｄ??图１－３细胞系中ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ表达水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＣＰＥＢ３?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?ｉｎ?ｖａｒｉｏｕｓ?ＣＲＣ?ｌｉｎｅｓ．??根据上述结直肠癌细胞中ＣＰＥＢ３的表达情况，我们选择ＣＰＥＢ３相对低表达??的结直肠癌细胞株ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６进行外源性过表达ＣＰＥＢ３，而对ＣＰＥＢ３相对??高表达的细胞株ＲＫＯ和ＬｏＶｏ进行内源性敲低ＣＰＥＢ３。进一步我们通过慢病毒转??染技术，构建了?ＣＰＥＢ３过表达和空载质粒慢病毒，分别感染ＳＷ４８０和ＨＣＴ１１６两??株细胞，构建了ＳＷ４８０－ｃｏｎｔｒｌ、ＳＷ４８０－ＣＰＥＢ３、ＨＣＴ１１６－ｃｏｎｔｒ＾ＢＨＣＴ１１６－ＣＰＥＢ３??细胞株。同时，我们使用ＣＰＥＢ３特异性ｓｈＲＮＡ和相应的对照（Ｃｏｎｔｒｌ）慢病毒感??染ＲＫＯ和ＬｏＶｏ两株细胞，构建了ＲＫＯ－ｃｏｎｔｒｌ、ＲＫ０－ｓｈＣＰＥＢ３、ＬｏＶｏ－ｃｏｎｔｒｌ和??ＬｏＶｏ－ｓｈＣＰＥＢ３细胞株。最后，我们通过ｑＲＴ－ＰＣＲ?（图?１－４Ａ）和ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ?（图??１－４Ｂ）验证ＣＰＥＢ３过表达和敲低效果。??Ａ?１２００￣｜?＊＊?ｍ｜?ｐｉ?｜?＜?１．５＊１?ｓｈＣｔｒｌ??ｉｌｌ?１?ｒ３?ＨｉｉｉＴ??Ｐ?ｌＵｔ?ｓ｜：：ｌｕｌｉ??ＳＷ４８０?ＨＣＴ１１６?ＬＯＶＯ?ＲＫＯ??Ｂ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]大肠癌筛查共识与争议[J]. 王振军,付李缘. 临床外科杂志. 2018(10)
[3]Lynch syndrome and Lynch syndrome mimics: The growing complex landscape of hereditary colon cancer[J]. John M Carethers,Elena M Stoffel. World Journal of Gastroenterology. 2015(31)
本文编号：3256223
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