识别髓系白血病Hu3A4-CAR的构建及体内外生物学特性研究

发布时间：2021-06-30 16:41

　　研究背景和目的急性白血病是儿童中最常见的癌症类型。尽管该疾病的治疗取得了进展,但仍有约20%的患者死于耐药或复发^[1]。在过去的十年中,分子研究已经发现与儿童急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）和急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia,ALL）相关的遗传标记越来越多,这些标志物可以增强风险分层,改变治疗策略可改善患者预后。ALL常伴有与淋巴细胞发育和细胞周期调控有关的基因突变和染色体易位^[2]。现在越来越多的证据表明,表观遗传学改变（包括DNA甲基化差异）会影响白血病的易感性和预后^[3]。组蛋白甲基化失调可能影响与肿瘤发生有关的重要细胞过程,例如增殖和分化,从而导致肿瘤^[4]。TET2是10-11易位基因家族的成员,催化DNA中的5-甲基胞嘧啶向5-羟甲基胞嘧啶的转化。SET和MYND结构域蛋白2（SMYD2）是一种甲基转移酶,可以调节包括组蛋白在内的几种蛋白质的活性^[5]。两种基因的异常表达都被报道与血液肿瘤... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

Hu3A4-CAR的构建和体内外生物学特性的实验流程图

浙江大学博士学位论文正文第一部分182.成功构建慢病毒表达载体pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ2.1克隆载体pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ成功构建我们以真核表达载体pcDNA3.1/Hu3A4-4-1BB-3ζ为模板，PCR扩增后电泳跑胶纯化（图1.4），连接至T载体，成功构建了pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ克隆载体（图1.5），为构建慢病毒表达载体pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ做基矗图1.4Hu3A4-4-1BB-3ζXbaISalIPCRHu3A4-4-1BB-3ζXbaISalIPCR纯化图1.5pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ质粒抽提电泳图2.2慢病毒表达载体pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ被成功地构建。预构建的质粒图谱为：

浙江大学博士学位论文正文第一部分19图1.6慢病毒表达载体pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ结构的示意图分别双酶切pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ、pLenti/C427z质粒（图1.7），所得的目的片段Hu3A4-4-1BB-3ζ与双酶切的载体pLenti用T4酶连体系相连。连接产物经感受态细菌Transblue转化后，获得的阳性克隆测序证实正确，双酶切电泳条带显示目的条带出现在1500bp，也证实慢病毒表达载体pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ构建成功（图1.8）。图1.7pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ质粒和pLenti/C427zXbaISalI质粒双酶切电泳图

【参考文献】：
期刊论文
[1]白血病异种移植模型的应用研究进展[J]. 杨翔,袁永平,陈懿建.  中国实验血液学杂志. 2019(04)
[2]慢病毒载体构建及结构优化[J]. 李振宇.  国外医学(分子生物学分册). 2002(05)



本文编号：3258106