BCAT1过表达诱导代谢重编程促进肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭

发布时间：2021-07-06 19:11

　　研究背景肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌病例的85%,NSCLC主要包括肺腺癌（LUAD）和鳞状细胞癌（SCC）。在NSCLC病例中,LUAD患者约占60%,复发率高且5年总生存率很低是引起肺腺癌死亡率高的主要原因。因此,筛选关键作用因子并阐明其在LUAD发展中的作用机制,对LUAD防治至关重要。支链氨基酸转氨酶1（BCAT1）与人类多种恶性肿瘤相关,研究表明BCAT1在胃癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多种肿瘤组织中高表达,并且BCAT1的高表达与多种癌症的预后不良、肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭密切相关。我们对临床LUAD样本检测发现BCAT1在癌组织中高表达,表明BCAT1很可能参与了 LUAD的发展,因此,本项目拟研究BCAT1在LUAD发展中的作用机制,为临床LUAD诊断与治疗提供实验依据。研究目的本研究旨在阐明体外条件下BCAT1对肺腺癌发展的影响及其作用机制。研究方法1.在包含由93个人类LUAD组织和85个癌旁组织组成的组织芯片中,用免疫组化的方法检测肺腺癌癌组织及癌旁组织中BCAT1的蛋白表达水平,染色结果按强度和阳性率进行... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１免疫组化法检测ＢＣＡＴ１在人肺腺癌（ＬＵＡＤ）组织中的表达??（Ａ）组织芯片阵列排列示意图（左），蓝色代表癌组织，黄色代表癌旁组织

?ＢＣＡＴ１过表达促进肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭???证明ＢＣＡＴ１稳定过表达，Ｃｔｒｌ代表过表达对照Ａ５４９细胞，ＢＣＡＴ１－０Ｅ代表ＢＣＡＴ１??过表达的Ａ５４９细胞。慢病毒ｓｈ］、ｓｈ２、ｓｈ３分别转染Ａ５４９细胞用来敲低ＢＣＡＴ１??表达，如图１．２Ｄ、Ｅ所示，ＷＢ和ｑＰＣＲ在蛋白和ｍＲＮＡ水平验证ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３??敲低ＢＣＡＴ１表达的效果，ｓｈＣｔｒｌ代表敲低对照的Ａ５４９细胞，ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３代表转??入ｓｈｌ，ｓｈ２，ｓｈ３慢病毒的Ａ５４９细胞。结合ｑＰＣＲ和ＷＢ结果，由于ｓｈｌ，?ｓｈ２敲??低效果显著，因此选择ｓｈｌ和ｓｈ２做后续试验。??Ａ????ＢＣＡＴｌ??ＮＣＩ－Ｈ１９７５?Ａ５４９?ＣＬＩ－５?ＨＣＣ８２７??Ｂ?Ｃ??ｇ?６ｉ?■??－?ｍａｍ?｛；?■??ｐ－Ａｃｔｉｎ?１?２ｊ?ｌ＾Ｈ；??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－〇Ｅ?Ｂ?＇?｜?！?ｊ??Ｄ?厂?Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴ１－ＯＥ??Ｅ??〇３?２．５－．??Ｓ?ｐＬ??ｌ２－°－?＞??ＢＣＡＴｌ?＞?１１５．??Ｅ?…??？?Ａ?■＆?＇？０－?ｒ＾－ｉ??［３－Ａｃｔｉｎ?令?『■卞??ｇ?０．５－?｜Ｓ｜?国?Ｊ｜｜??ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈｌ?ｓｈ２?ｓｈ３?｜?０．〇ＪＪ＿ＩＪ＿＾Ｐ＿＾Ｐ＿Ｊｉ｜ｌ?＿??ｓｈＣｔｒｌ?ｓｌｉｌ?ｓｈ２?ｓｈ３??图１．２?ＷＢ、ｑＰＣＲ验证ＢＣＡＴｌ过表达及敲低效果??（Ａ）ＷＢ检测ＢＣＡＴｌ在肺腺癌细胞系ＮＣＩ－Ｈ１９７５、Ａ５４９、ＣＬＩ－５、ＨＣＣ８２７中的蛋白表达??水平。（Ｂ）?ＷＢ验证ＢＣＡＴｌ过表达效果。（Ｃ）?ｑＰ

照Ａ５４９细胞以５ｘ１?〇４个细胞／ｍＬ的密度接种在Ｅ－Ｐｌａｔｅ??１２中，利用实时无标记细胞功能分析仪每５?ｍｉｎ测量一次细胞阻抗（取决于附??着细胞的数量和形状），持续７０小时，以监测细胞的增殖情况。如图】．３Ａ所示，??在０－２８ｈ，?ＢＣＡＴ１过表达和Ｃｔｒｌ细胞增殖速率相当，２８ｈ之后，ＢＣＡＴ１过表达??细胞增殖速率加快，细胞数逐渐多于对照细胞，且差距具有统计学意义。细胞??增殖能力的另一个有效测定方法是克隆形成试验，通过计数克隆数量，可对细??胞的增殖潜力做定量分析。图１．３Ｂ中的克隆形成测定表明，与对照细胞相比，??ＢＣＡＴ１过表达细胞的克隆形成能力相对提高，且差异具有统计学意义。以上结??果提示，ＢＣＡＴ１过表达对Ａ５４９细胞的增殖有促进作用。??Ａ??．．卜…－丨．…１?…，????ＢＣＡＴｌ?－ＯＥ??■４?－?????．?Ｃｔｒｌ?」＊＊??４?－?￣－？?－?．．?：—???????？?ａ?ｔ?．?？Ｔ?．?ｉ?－?－?．?ｉ?．?．?．?ｉ?．?．?，?ｉ?．?．?．?ｉ?．?！?■?■?Ｉ?．?．?．?．?．?．?．?Ｉ?－?．?｜?．．．?｜?．?．?ｉ?■?■?■?ｉ?．?■?Ｉ??（０?？Ｃ?＊？?？＊．？?１＊４?ＴＯ?２Ｂｔ?ＭＯ?？３ｔ?？？?ＳＪ?ＳＳＪ?ｔＳ３??（ｍ?Ｈｏｕｒ）??Ｂ??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－ＯＥ??ｌＯＯ－ｉ?＊?＊??＿?＃幢??Ｃｔｒｌ?ＢＣＡＴｌ－ＯＥ??图１．３?ＢＣＡＴｌ过表达Ａ５４９细胞增殖与克隆形成能力检测??（Ａ）实时细胞电子传感系统

【参考文献】：
期刊论文
[1]宫颈癌组织中c-myc、bcat1的表达及其临床意义[J]. 乌守恒,曾晓峰,王,萍,周颖,林卫.  四川大学学报(医学版). 2018(05)
[2]ECA39 is a novel distant metastasis-related biomarker in colorectal cancer[J]. Reigetsu Yoshikawa,Hidenori Yanagi,Yoshinori Fujiwara,Masafumi Noda,Toshihiko Yagyu,Makoto Gega,Tsutomu Oshima,Takehira Yamamura,Haruki Okamura,Yoshiro Nakano,Tomonori Morinaga,Tomoko Hashimoto-Tamaoki.  World Journal of Gastroenterology. 2006(36)



本文编号：3268816