Sp1 Ser59位点磷酸化促进aPKC -1 /Snail介导的胆管癌上皮—间质细胞转化及免疫抑制
发布时间：2021-07-18 13:58
第一部分磷酸化i TRAQ技术筛选a PKC-ι直接磷酸化底物Sp1（Ser59）目的:检测aPKC-ι的直接磷酸化底物及位点,探讨aPKC-ι调控胆管癌上皮-间质细胞转化（EMT）及免疫抑制的分子机制。方法:将a PKC-ι-c DNA表达载体转导入人胆管癌细胞系中,构建稳定过表达a PKC-ι的人胆管癌细胞系并设置为实验组,对照组为空转病毒组。应用基于磷酸化i TRAQ（Isobaric tag for relative and absolute quantitation,i TRAQ）技术的定量蛋白质组学研究,筛选出差异表达的磷酸化位点、肽段及蛋白质,并进行生物信息学分析,如GO分析、KEGG富集分析、蛋白质互作网络分析等。选取参与EMT过程的相关信号通路中差异表达的磷酸化蛋白位点,应用WB、IF进行验证;结合免疫共沉淀实验（Co-IP）检测该磷酸化蛋白在胆管癌组织及细胞中与a PKC-ι的相互结合关系,论证其是否为a PKC-ι的直接磷酸化底物。结果:定量磷酸化蛋白质组学研究发现,稳定过表达aPKC-ι的胆管癌细胞与未经任何处理的胆管癌细胞相对比,共有311个差异表达的磷酸化肽...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EMT在肿瘤侵袭转移过程中处于起始和核心环节[7]
iTRAQ实验流程
中 科 技 大 学 博 士 学 位 aPKC-ι表达是否上调。结果所示，慢病毒转染效率约TFK-1-aPKC-ι-cDNA 和 HuCCT-1-aPKC-ι-cDNA 细胞高于空转病毒组及空白组（见图 1-3），提示转染成功
【参考文献】：
期刊论文
[1]Correlation of aPKC-ι and E-cadherin expression with invasion and prognosis of cholangiocarcinoma[J]. Qiang Li, Jian-Ming Wang, Cong Liu, Bao-Lai Xiao, Jin-Xi Lu and Sheng-Quan ZouAuthor Affiliations: Department of General Surgery , and Department of Pathology , Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(01)
本文编号：3289712
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：123 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EMT在肿瘤侵袭转移过程中处于起始和核心环节[7]
iTRAQ实验流程
中 科 技 大 学 博 士 学 位 aPKC-ι表达是否上调。结果所示，慢病毒转染效率约TFK-1-aPKC-ι-cDNA 和 HuCCT-1-aPKC-ι-cDNA 细胞高于空转病毒组及空白组（见图 1-3），提示转染成功
【参考文献】：
期刊论文
[1]Correlation of aPKC-ι and E-cadherin expression with invasion and prognosis of cholangiocarcinoma[J]. Qiang Li, Jian-Ming Wang, Cong Liu, Bao-Lai Xiao, Jin-Xi Lu and Sheng-Quan ZouAuthor Affiliations: Department of General Surgery , and Department of Pathology , Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(01)
本文编号：3289712
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