循环肿瘤浸润性淋巴细胞在肺癌治疗中的作用之个案分析
发布时间：2021-07-20 20:17
背景:肺癌是世界范围内的恶性肿瘤之一,是男性癌症死亡的主要原因,也是世界范围内女性癌症死亡的第二大原因。多年来,外科、化疗、放疗和靶向治疗已被广泛应用于临床,然而,肺癌的总体生存率仍然不理想。如今,肺癌治疗的革命正在努力改变这种状况,免疫抑制剂（ICIs）细胞免疫治疗将成为肺癌治疗的新的突破点。循环肿瘤浸润性淋巴细胞（Circulation Tumor infiltrating lymphocytes,CTIL）是一类存在于外周血中肿瘤浸润性且具有抗原效应的细胞群,包括T细胞、B细胞和NK细胞,大量研究证明增加CTILs一直与不同的人类肿瘤的临床治疗效果良好结果一致。近年来,有大量的实验组对肺癌进行了全基因组测序,筛选出了许多在肺癌发生中差异表达的基因,这些基因对肺癌的发生发展起一定的调节作用。尽管人们发现了很多在肝癌中差异表达的基因,但还是有很多起重要调节作用的基因未被发现。目的:本课题拟探讨CTIL中CD28和CD27单克隆抗体在肺癌患者免疫治疗中的作用,以及肺癌患者外周血中相关细胞的表达变化,以及通过高通量测序技术筛选出在肺癌发生发展中起作用的特异性基因,为肺癌的诊断和治疗提供新...
【文章来源】：鲁东大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 研究背景
1.1.1 肺癌简介
1.1.2 CTIL在治疗肺癌的研究
1.1.3 肺癌基因组学研究
1.2 研究目的
1.3 总结
第2章 循环肿瘤浸润淋巴细胞在肺癌治疗上的作用及相关特异性基因
2.1 CTIL免疫治疗方法
2.1.1 CTIL简介和作用机制
2.1.2 TIL作为癌症诊断标准
2.1.2.1 TILs能够在早期和晚期预测患者
2.1.2.2 TILs是一种重要的预后标志
2.1.3 肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)临床治疗
2.2 CD27在肿瘤免疫调节中的作用
2.2.1 CD27
2.2.2 CD27对T细胞活化
2.2.3 CD27/CD70共刺激系统与癌症免疫
2.3 CD28在肿瘤免疫调节中的作用
2.3.1 CD28
2.3.2 CD28协同刺激T细胞激活
2.4 IncRNA在肿瘤发生发展中的调控
第3章 材料和方法
3.1 实验材料
3.1.1 实验样品
3.1.2 主要实验仪器
3.1.3 主要试验试剂
3.1.4 引物序列
3.2 试验方法
3.2.1 血细胞分析
3.2.2 LD001样品CTIL细胞体外培养和回输
3.2.3 CT图分析
3.2.4 流式细胞术检测
3.2.5 RNA提取
3.2.6 逆转录PCR检测
3.2.7 Real-timePCR检测
3.2.8 高通量测序长链非编码RNA
3.2.9 引物序列设计
3.2.10 统计学处理
第4章 结果与分析
4.1 CT统计结果
4.1.1 肿瘤1统计分析
4.1.2 肿瘤2统计分析
4.1.3 肿瘤3统计分析
4.1.4 肿瘤4统计分析
4.1.5 肿瘤5统计分析
4.1.6 小结
4.2 流式细胞术结果
4.2.1 T淋巴细胞的比例变化
4.2.2 CD4+T的细胞比例
4.2.3 CD8+T的细胞比例
4.2.3.1 CD28+的细胞比例
4.2.3.2 CD27+的细胞比例
4.2.4 CD56+NK细胞的比例
4.3 RNA提取结果分析
4.4 血细胞分析结果
4.5 高通量测序结果
4.5.1 数据产出情况
4.5.2 Reads与参考基因组比对情况统计
4.5.3 差异表达量分析
4.5.3.1 比较组之间差异表达基因分布
4.5.3.2 差异表达基因火山图
4.5.3.3 差异表达基因聚类图
4.5.4 确定差异表达基因,设计引物序列
4.5.4.1 通过蛋白互作网络分析确定候选基因
4.5.4.2 确定差异表达基因
4.6 候选基因验证结果
4.6.1 逆转录PCR检测
4.6.2 Real-timePCR检测
第5章 结果与讨论
5.1 CT肿瘤组织大小统计结果
5.2 流式细胞术结果
5.3 特异性突变基因的筛选与鉴定
5.4 讨论
参考文献
附录A 实验仪器
附录B 实验试剂
附录C 常用缓冲液及试剂的配置
附录D RNA提取的方法
附录E 琼脂糖凝胶电泳
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pan-negative型非小细胞肺癌的研究进展[J]. 孙丽,熊志成,韩琤波. 中国肺癌杂志. 2018(02)
[2]2013年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2017(01)
[3]TIL肿瘤过继细胞治疗研究进展[J]. 陈晚华,刘辉,汪毕,钱其军. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(06)
[4]CD28分子的研究进展[J]. 郝秀丽,张逢春. 北华大学学报(自然科学版). 2004(02)
本文编号：3293521
【文章来源】：鲁东大学山东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 研究背景
1.1.1 肺癌简介
1.1.2 CTIL在治疗肺癌的研究
1.1.3 肺癌基因组学研究
1.2 研究目的
1.3 总结
第2章 循环肿瘤浸润淋巴细胞在肺癌治疗上的作用及相关特异性基因
2.1 CTIL免疫治疗方法
2.1.1 CTIL简介和作用机制
2.1.2 TIL作为癌症诊断标准
2.1.2.1 TILs能够在早期和晚期预测患者
2.1.2.2 TILs是一种重要的预后标志
2.1.3 肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)临床治疗
2.2 CD27在肿瘤免疫调节中的作用
2.2.1 CD27
2.2.2 CD27对T细胞活化
2.2.3 CD27/CD70共刺激系统与癌症免疫
2.3 CD28在肿瘤免疫调节中的作用
2.3.1 CD28
2.3.2 CD28协同刺激T细胞激活
2.4 IncRNA在肿瘤发生发展中的调控
第3章 材料和方法
3.1 实验材料
3.1.1 实验样品
3.1.2 主要实验仪器
3.1.3 主要试验试剂
3.1.4 引物序列
3.2 试验方法
3.2.1 血细胞分析
3.2.2 LD001样品CTIL细胞体外培养和回输
3.2.3 CT图分析
3.2.4 流式细胞术检测
3.2.5 RNA提取
3.2.6 逆转录PCR检测
3.2.7 Real-timePCR检测
3.2.8 高通量测序长链非编码RNA
3.2.9 引物序列设计
3.2.10 统计学处理
第4章 结果与分析
4.1 CT统计结果
4.1.1 肿瘤1统计分析
4.1.2 肿瘤2统计分析
4.1.3 肿瘤3统计分析
4.1.4 肿瘤4统计分析
4.1.5 肿瘤5统计分析
4.1.6 小结
4.2 流式细胞术结果
4.2.1 T淋巴细胞的比例变化
4.2.2 CD4+T的细胞比例
4.2.3 CD8+T的细胞比例
4.2.3.1 CD28+的细胞比例
4.2.3.2 CD27+的细胞比例
4.2.4 CD56+NK细胞的比例
4.3 RNA提取结果分析
4.4 血细胞分析结果
4.5 高通量测序结果
4.5.1 数据产出情况
4.5.2 Reads与参考基因组比对情况统计
4.5.3 差异表达量分析
4.5.3.1 比较组之间差异表达基因分布
4.5.3.2 差异表达基因火山图
4.5.3.3 差异表达基因聚类图
4.5.4 确定差异表达基因,设计引物序列
4.5.4.1 通过蛋白互作网络分析确定候选基因
4.5.4.2 确定差异表达基因
4.6 候选基因验证结果
4.6.1 逆转录PCR检测
4.6.2 Real-timePCR检测
第5章 结果与讨论
5.1 CT肿瘤组织大小统计结果
5.2 流式细胞术结果
5.3 特异性突变基因的筛选与鉴定
5.4 讨论
参考文献
附录A 实验仪器
附录B 实验试剂
附录C 常用缓冲液及试剂的配置
附录D RNA提取的方法
附录E 琼脂糖凝胶电泳
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Pan-negative型非小细胞肺癌的研究进展[J]. 孙丽,熊志成,韩琤波. 中国肺癌杂志. 2018(02)
[2]2013年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2017(01)
[3]TIL肿瘤过继细胞治疗研究进展[J]. 陈晚华,刘辉,汪毕,钱其军. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2012(06)
[4]CD28分子的研究进展[J]. 郝秀丽,张逢春. 北华大学学报(自然科学版). 2004(02)
本文编号：3293521
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