miR-486-3p通过抑制FGFR4和EGFR水平介导肝细胞肝癌索拉非尼耐药的发生
发布时间：2021-07-30 08:59
背景:肝细胞肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤,是我国第四常见的恶性肿瘤,也是导致癌症相关死亡的第三大原因,严重威胁人民群众生命健康。临床上,晚期肝癌患者往往没有很好的治疗办法。肝癌对放化疗的治疗效果都理想,这使得靶向治疗成为晚期肝癌治疗中尚可以尝试的治疗手段。近年来,肝癌的靶向药物治疗方法开发取得了不少进展。但靶向药物治疗过程中,耐药问题的发生却成为一个新的难题。在过去十多年中,索拉非尼是唯一批准应用于晚期肝癌治疗的靶向药物,它能显著延长患者生存时间,延缓肿瘤进展。但同时,索拉非尼应用过程中,药物耐药产生的几率也非常高,极大地限制了其临床应用效果。关于索拉非尼耐药发生的机制的既往研究有很多报道。但其发生的具体机制尚不十分明确。micro RNAs通过调节蛋白转录后表达,参与了许多生物过程的调控。而在索拉非尼耐药的发生发展过程中,是否有micro RNAs的参与,需要进一步研究。实验方法:首先,我们建立了索拉非尼耐药的肝癌细胞系,作为研究的体外模型。采用micro RNA测序,q PCR验证等实验手段,分析索拉非尼耐药过程中,存在差异表达的micro RNAs。其次,采用CCK-8筛选其中...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
成功建立索拉非尼耐药的肝细胞肝癌细胞株。使用CCK-8试剂检测细胞生长情况。在96孔板中进行实验,采用第一天的细胞数量作为参照,进行标准化。在相同浓度的索拉非尼处理情况下,随着时间变化,相比于野生型细胞,耐药细胞有更高的细胞活性。在96孔板中进行实验,采用不加索拉非尼处理的细胞数量作为参照,进行标准化。在不同浓度的索拉非尼处理情况下,观察48小时时,细胞的生长情况。相比于野生型细胞,耐药细胞的IC50更高。
已知miRNAs可能参与肿瘤发生发展过程的各项进程,并在其中扮演重要的角色,发挥转录后调节的作用。同时近期研究也发现,miRNAs具有开发肿瘤治疗药物的潜力,或能用于增强其他肿瘤治疗药物的疗效2624。因此,为了探究在索拉非尼耐药过程中,miRNAs的变化情况,我们选用Huh7-SR细胞及其野生型Huh7细胞进行miRNA测序,以确定可能影响索拉非尼耐药发生发展进程的miRNAs。miRNA测序结果发现,两种细胞中存在26个显著差异表达的miRNAs(图2)。测序结果提示Huh7-SR细胞中,miR-671-3p、miR-378a-5 p、miR-328-3p、miR-486-3p和miR-378a-3p五个miRNAs较其野生型细胞显著减少(图2)。为了验证测序结果的可靠性,我们采用qRT-PCR方法在Huh7-SR,SK-Hep-1-SR和HepG2-SR三个细胞系中进行验证。结果发现miR-328-3p在Huh7-SR细胞中的表达量与测序结果不符,其余在三个耐药细胞中的表达情况与测序数据相符(图3A)。
为了进一步检测这些miRNAs的生物学功能,我们用miRNA寡核苷酸类似物(miRNA mimics)转染进行生物学功能实验。在三个耐药肝癌细胞株中,分别转染这五种miRNA mimics,用CCK-8检测细胞数量,研究增加这些miRNAs的表达水平是否会影响细胞对索拉非尼的反应。结果发现,在三个耐药细胞系中,增加miR-486-3p的表达能显著增加耐药细胞对索拉非尼敏感性(图3B)。为了能从临床水平进一步检验miR-486-3p在肝癌中的作用,我们采用网络数据库Kaplan Meier-Plotter进行分析27。结果发现在肝癌数据库中,患者肿瘤组织中miR-486-3p的水平越高,患者预后越好。miR-486-3p高的组的患者总体生存率(HR=0.38;95%CI:0.24到0.62;P=3.7×10-5)和无病生存率(HR=0.55;95%CI:0.36到0.83;P=0.0037)都显著比miR-486-3p低的组好(图4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[2]EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义[J]. 赵荫农,曹骥,吴飞翔,欧超,袁卫平,莫钦国,韦薇,李瑗,苏建家,梁安民. 癌症. 2004(07)
本文编号：3311116
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
成功建立索拉非尼耐药的肝细胞肝癌细胞株。使用CCK-8试剂检测细胞生长情况。在96孔板中进行实验,采用第一天的细胞数量作为参照,进行标准化。在相同浓度的索拉非尼处理情况下,随着时间变化,相比于野生型细胞,耐药细胞有更高的细胞活性。在96孔板中进行实验,采用不加索拉非尼处理的细胞数量作为参照,进行标准化。在不同浓度的索拉非尼处理情况下,观察48小时时,细胞的生长情况。相比于野生型细胞,耐药细胞的IC50更高。
已知miRNAs可能参与肿瘤发生发展过程的各项进程,并在其中扮演重要的角色,发挥转录后调节的作用。同时近期研究也发现,miRNAs具有开发肿瘤治疗药物的潜力,或能用于增强其他肿瘤治疗药物的疗效2624。因此,为了探究在索拉非尼耐药过程中,miRNAs的变化情况,我们选用Huh7-SR细胞及其野生型Huh7细胞进行miRNA测序,以确定可能影响索拉非尼耐药发生发展进程的miRNAs。miRNA测序结果发现,两种细胞中存在26个显著差异表达的miRNAs(图2)。测序结果提示Huh7-SR细胞中,miR-671-3p、miR-378a-5 p、miR-328-3p、miR-486-3p和miR-378a-3p五个miRNAs较其野生型细胞显著减少(图2)。为了验证测序结果的可靠性,我们采用qRT-PCR方法在Huh7-SR,SK-Hep-1-SR和HepG2-SR三个细胞系中进行验证。结果发现miR-328-3p在Huh7-SR细胞中的表达量与测序结果不符,其余在三个耐药细胞中的表达情况与测序数据相符(图3A)。
为了进一步检测这些miRNAs的生物学功能,我们用miRNA寡核苷酸类似物(miRNA mimics)转染进行生物学功能实验。在三个耐药肝癌细胞株中,分别转染这五种miRNA mimics,用CCK-8检测细胞数量,研究增加这些miRNAs的表达水平是否会影响细胞对索拉非尼的反应。结果发现,在三个耐药细胞系中,增加miR-486-3p的表达能显著增加耐药细胞对索拉非尼敏感性(图3B)。为了能从临床水平进一步检验miR-486-3p在肝癌中的作用,我们采用网络数据库Kaplan Meier-Plotter进行分析27。结果发现在肝癌数据库中,患者肿瘤组织中miR-486-3p的水平越高,患者预后越好。miR-486-3p高的组的患者总体生存率(HR=0.38;95%CI:0.24到0.62;P=3.7×10-5)和无病生存率(HR=0.55;95%CI:0.36到0.83;P=0.0037)都显著比miR-486-3p低的组好(图4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[2]EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义[J]. 赵荫农,曹骥,吴飞翔,欧超,袁卫平,莫钦国,韦薇,李瑗,苏建家,梁安民. 癌症. 2004(07)
本文编号：3311116
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