舒尼替尼调控miR-143抑制人肾癌786-O细胞增殖与侵袭的研究

发布时间：2021-08-05 19:07

　　背景:肾癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤,中位无进展生存期较低。舒尼替尼是治疗晚期肾癌最有效的药物之一,虽然舒尼替尼治疗肾癌已经被视为常规方案,但是由于副作用和耐药的出现,总体上仍然未能明显提高患者生存率。因此,寻找新的、更有效的治疗肾癌的方法意义重大。目的:在本研究中,以肾癌786-O细胞为研究对象,首先利用慢病毒介导miR-143过表达后检测细胞迁移、增殖和侵袭能力的改变,接着检测舒尼替尼处理细胞后miR-143表达变化,进而探讨舒尼替尼调控miR-143对肾癌细胞迁移、增殖和侵袭的影响及可能的机制。方法:将miR-143mimics、miR-NC慢病毒原液分别稀释10倍、100倍、1000倍、10000倍后侵染293T细胞,72h后荧光显微镜下计数荧光细胞,结合病毒稀释倍数计算病毒滴度;将miR-143mimics、miR-NC慢病毒稳转入肾癌786-O细胞,qRT-PCR检测miR-143相对表达量;用浓度为0、2、4、6、8、10、12μmol/L的舒尼替尼处理786-O细胞48h,计算舒尼替尼作用于786-O细胞48h的IC50值,选取该值作为后续实验加药浓度;用IC50值浓度的... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miR-143稳转细胞株的构建（A：白光下观察；B：荧光显微镜下观察；C：荧光定量PCR检测miR-143相对表达量

实 验 结 果 1.慢病毒滴度复核 将 miR-143mimics 慢病毒悬液、miR-NC 慢病毒悬液分别稀释 10 倍、100 倍、1000 倍、10000 倍，侵染 293T 细胞 72h 后，于倒置荧光显微镜下观察荧光分布情况。结果显示，两组慢病毒悬液的荧光表达均较强，通过计数荧光细胞数结合病毒稀释倍数，计算可得 miR-143mimics、miR-NC 的滴度均大于 1×108TU/ml，病毒滴度符合实验要求，可以进行后续实验（图 1）。 病毒稀释倍数： 10-1 10-2 10-3 10-4

Mtt法检测IC50值

【参考文献】：
期刊论文
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[2]linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭[J]. 彭芳,陈艳宇,王贵明,周扬帆.  中南医学科学杂志. 2019(04)
[3]常见泌尿生殖系统肿瘤的病因学分析及预防[J]. 董德鑫,李汉忠,纪志刚,石冰冰.  基础医学与临床. 2019(06)
[4]PI3K/AKT/MTOR信号通路对肾癌A498细胞增殖、迁移及侵袭的影响研究[J]. 郭双双,张治业,王颖.  癌症进展. 2017(12)
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[6]5-Aza-CdR对人肾癌OS-RC-2细胞生长及γ-连环蛋白表达的影响[J]. 陶美满,孙浩,田福起,马克钧,郭涛,潘鹏,徐强.  江苏大学学报(医学版). 2009(03)

硕士论文
[1]低表达DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）基因对膀胱癌细胞生长和阿霉素耐药性影响的体内外研究[D]. 陈柯.南方医科大学 2016
[2]雌激素受体α通过上调DNMT1和DNMT3b促进乳腺癌MCF-7细胞紫杉醇耐药[D]. 丁海剑.南京医科大学 2014



本文编号：3324298