体外扩增培养的NK/iNKT细胞及γδT细胞对Jurkat、A549、K562及HepG2细胞株的杀伤研究
发布时间：2021-08-06 07:54
目的:观察及对比NK细胞、i NKT细胞及γδT细胞的体外扩增效率、表面标志表达及细胞因子分泌情况,并对比其对肿瘤细胞株的杀伤效果,为免疫细胞的临床抗肿瘤应用提供参考。方法:1.三种免疫细胞的扩增培养及功能检测采集健康供者的静脉血,使用Ficoll密度梯度离心获得PBMCs,检测细胞数量、CD56等表面标志表达情况及颗粒酶B等细胞因子分泌情况后,分别培养扩增3种免疫细胞。（1）NK细胞扩增培养用含5%血清、500U/ml IL-2、2ng/ml IL-15、1μg/ml OK432的RPMI-1640培养基培养24小时,后更换为含5%血清、1000U/ml IL-2、2ng/ml IL-15的RPMI-1640培养基继续培养,第14天获得NK细胞。（2）i NKT细胞扩增培养用含有10%血清、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素的RPMI-1640培养基悬浮PBMCs,加入终浓度为100ng/ml的α-Gal Cer,置于37℃、饱和湿度的5%CO2培养箱中培养,第4天和第7天补加终浓度为100ng/ml的α-Gal Cer和终浓度为20IU/ml的IL-2,之后每3-4天补充...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 综述 NK/iNKT细胞及γδT细胞的生物学特性及抗肿瘤作用
2.1 NK细胞
2.1.1 NK细胞的发育
2.1.2 NK细胞的分类
2.1.3 NK细胞的作用机制
2.1.4 NK细胞的体外扩增
2.1.5 NK细胞的抗肿瘤应用
2.2 iNKT细胞
2.2.1 iNKT细胞的发育
2.2.2 iNKT细胞的作用及作用机制
2.2.3 iNKT细胞的体外扩增
2.2.4 iNKT细胞的抗肿瘤应用
2.3 γδT细胞
2.3.1 γδT细胞的发育
2.3.2 γδT细胞的分类
2.3.3 γδT细胞的作用机制
2.3.4 γδT细胞的体外扩增
2.3.5 γδT细胞的抗肿瘤应用
2.4 总结
第3章 材料与方法
3.1 细胞准备
3.2 试剂准备
3.3 实验仪器准备
3.4 实验方法
3.4.1 分离PBMCs
3.4.2 肿瘤细胞株培养方法
3.4.4 iNKT细胞的培养
3.4.5 γδT细胞的培养
3.4.6 免疫表型检测方法
3.4.7 颗粒酶B的胞内检测
3.4.8 细胞因子检测
3.4.9 细胞毒作用检测
3.5 统计学方法
第4章 结果
4.1 培养前后细胞数量变化
4.2 三种细胞培养后表面标志表达情况
4.3 细胞因子分泌情况
4.3.1 培养后颗粒酶B分泌情况
4.3.2 其他细胞因子
4.4 培养后免疫细胞对肿瘤细胞株杀伤效率
4.4.1 每种免疫细胞对不同肿瘤细胞株杀伤效果
4.4.2 不同免疫细胞对每种肿瘤细胞株的杀伤效率
第5章 讨论
5.1 培养前后细胞数量变化
5.2 细胞表面标志表达变化
5.3 细胞因子分泌情况
5.4 肿瘤杀伤效果
5.4.1 每种免疫细胞对不同肿瘤细胞杀伤效果
5.4.2 不同免疫细胞对每种肿瘤细胞的杀伤效果
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展[J]. 吴啟洪,朱婷婷,冯婷,李虹. 医学综述. 2016(13)
[2]恒定自然杀伤细胞在感染免疫中的作用研究进展[J]. 刘琳琳,聂汉祥. 疑难病杂志. 2016(05)
[3]自体肿瘤抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肾癌的疗效观察[J]. 王辉,封芳,朱民高,王柔抒,王小平,吴颖,庄志祥. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(01)
[4]与自身免疫T1D相关的控制iNKT细胞发育的基因[J]. 李莉,李惠英,钟海燕,樊茂,刘晓宁. 中国免疫学杂志. 2014(12)
[5]Ⅰ型IFN体外增强人γδT细胞对骨肉瘤的杀伤作用[J]. 李朝旭,王锐英,唐际存. 中国免疫学杂志. 2014(11)
[6]γδT细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[J]. 夏莉,于鸿,刘玉侠. 中国免疫学杂志. 2014(03)
[7]四种NK细胞体外扩增方案的比较[J]. 王晓梦,李玲,于津浦,李慧,齐静,张澎,于文文,任秀宝,曹水. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(03)
[8]Gal-1单抗增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用[J]. 李华,周福祥,王育斌. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(01)
[9]探讨NK细胞抗肿瘤治疗的现存问题及其免疫治疗新途径[J]. 谭宇婷,曾莉,杨洋. 中国医学工程. 2012(04)
[10]一种新型自体NK细胞扩增培养方法的建立和初步临床应用[J]. 罗渊,陆承荣,段连宁,王喆,向培德,鲍荣凤,何晓锋,朱广卿,李为民. 空军医学杂志. 2011(03)
博士论文
[1]再生障碍性贫血骨髓TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T细胞体外活化特性研究[D]. 王迎雪.山东大学 2008
硕士论文
[1]人脐血树突状细胞体外培养及免疫功能的研究[D]. 郭松佳.山西医科大学 2006
本文编号：3325392
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 综述 NK/iNKT细胞及γδT细胞的生物学特性及抗肿瘤作用
2.1 NK细胞
2.1.1 NK细胞的发育
2.1.2 NK细胞的分类
2.1.3 NK细胞的作用机制
2.1.4 NK细胞的体外扩增
2.1.5 NK细胞的抗肿瘤应用
2.2 iNKT细胞
2.2.1 iNKT细胞的发育
2.2.2 iNKT细胞的作用及作用机制
2.2.3 iNKT细胞的体外扩增
2.2.4 iNKT细胞的抗肿瘤应用
2.3 γδT细胞
2.3.1 γδT细胞的发育
2.3.2 γδT细胞的分类
2.3.3 γδT细胞的作用机制
2.3.4 γδT细胞的体外扩增
2.3.5 γδT细胞的抗肿瘤应用
2.4 总结
第3章 材料与方法
3.1 细胞准备
3.2 试剂准备
3.3 实验仪器准备
3.4 实验方法
3.4.1 分离PBMCs
3.4.2 肿瘤细胞株培养方法
3.4.4 iNKT细胞的培养
3.4.5 γδT细胞的培养
3.4.6 免疫表型检测方法
3.4.7 颗粒酶B的胞内检测
3.4.8 细胞因子检测
3.4.9 细胞毒作用检测
3.5 统计学方法
第4章 结果
4.1 培养前后细胞数量变化
4.2 三种细胞培养后表面标志表达情况
4.3 细胞因子分泌情况
4.3.1 培养后颗粒酶B分泌情况
4.3.2 其他细胞因子
4.4 培养后免疫细胞对肿瘤细胞株杀伤效率
4.4.1 每种免疫细胞对不同肿瘤细胞株杀伤效果
4.4.2 不同免疫细胞对每种肿瘤细胞株的杀伤效率
第5章 讨论
5.1 培养前后细胞数量变化
5.2 细胞表面标志表达变化
5.3 细胞因子分泌情况
5.4 肿瘤杀伤效果
5.4.1 每种免疫细胞对不同肿瘤细胞杀伤效果
5.4.2 不同免疫细胞对每种肿瘤细胞的杀伤效果
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展[J]. 吴啟洪,朱婷婷,冯婷,李虹. 医学综述. 2016(13)
[2]恒定自然杀伤细胞在感染免疫中的作用研究进展[J]. 刘琳琳,聂汉祥. 疑难病杂志. 2016(05)
[3]自体肿瘤抗原致敏的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肾癌的疗效观察[J]. 王辉,封芳,朱民高,王柔抒,王小平,吴颖,庄志祥. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(01)
[4]与自身免疫T1D相关的控制iNKT细胞发育的基因[J]. 李莉,李惠英,钟海燕,樊茂,刘晓宁. 中国免疫学杂志. 2014(12)
[5]Ⅰ型IFN体外增强人γδT细胞对骨肉瘤的杀伤作用[J]. 李朝旭,王锐英,唐际存. 中国免疫学杂志. 2014(11)
[6]γδT细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[J]. 夏莉,于鸿,刘玉侠. 中国免疫学杂志. 2014(03)
[7]四种NK细胞体外扩增方案的比较[J]. 王晓梦,李玲,于津浦,李慧,齐静,张澎,于文文,任秀宝,曹水. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(03)
[8]Gal-1单抗增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用[J]. 李华,周福祥,王育斌. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2013(01)
[9]探讨NK细胞抗肿瘤治疗的现存问题及其免疫治疗新途径[J]. 谭宇婷,曾莉,杨洋. 中国医学工程. 2012(04)
[10]一种新型自体NK细胞扩增培养方法的建立和初步临床应用[J]. 罗渊,陆承荣,段连宁,王喆,向培德,鲍荣凤,何晓锋,朱广卿,李为民. 空军医学杂志. 2011(03)
博士论文
[1]再生障碍性贫血骨髓TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T细胞体外活化特性研究[D]. 王迎雪.山东大学 2008
硕士论文
[1]人脐血树突状细胞体外培养及免疫功能的研究[D]. 郭松佳.山西医科大学 2006
本文编号：3325392
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3325392.html
