基于PI3K/AKT/mTOR和ERK/MAPK信号通路探讨沙蚕蛋白酶（NAP）抗肺癌作用机制
发布时间：2021-08-07 14:54
肺癌——作为一种全球常见的恶性肿瘤疾病,其超高的发病率和死亡率,严重威胁人类的健康和生命。作为其两种亚型之一占比最多的非小细胞肺癌,一经确诊就处于不能通过手术治疗的晚期阶段或转移阶段,只能通过放疗或化疗的手段治疗,如:顺铂、卡铂及依托泊苷等化疗药物,但这些药物毒性较大,且长期使用易产生药物耐受性,因此寻找一种高效、低毒的抗癌药物迫切需求。因为海洋生物生存在独特的高盐、高压、低温、暗光、缺氧和强腐蚀性的恶劣环境,其酶的氨基酸组成或序列都与陆地生物蛋白有很大不同,在种类繁多的海洋蛋白酶的氨基酸序列中,潜在着许多具有生物活性的氨基酸序列的活性蛋白酶。因此,基于PI3K/AKT/mTOR和ERK/MAPK信号通路,本硕士学位论文探讨沙蚕蛋白酶（NAP）对抗肺癌机制研究。首先,采用转录组测序法进行研究,根据研究结果我们选择了PI3K/AKT/mTOR和MAPK这两条信号通路作为本文的研究方向。接着通过体外实验的细胞划痕、细胞周期和Western Blotting等实验,得知NAP可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路来诱导细胞凋亡的。随后我们检测了不同时间段p-ERK,p-AKT和clea...
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线流程图
表 3-1 RNA 纯度Tab.3-1 Purity of RNA胶图编号样品名称浓度(ng/μl)总量(μg)OD260/280OD260/230RIN 检测结果1H1299(空白组 1)737.80 10.31 2.00 1.72 8.10 A2H1299(空白组 2)735.00 9.97 1.90 1.67 8.80 A3H1299(30 μg/m LNAP 1)703.60 9.81 1.94 1.73 7.90 A4H1299(30 μg/m LNAP 2)660.40 7.21 1.92 1.72 9.30 A
第三章沙蚕蛋白酶对H1299细胞基因转录组的影响153.3.2Heatmap结果分析NAP处理H1299前后，有显著性差异表达的基因共有219个，如下图所示，选用红色、绿色和黑色来反映相对较高或较低的表达水平。图3-2NAP处理（NAP1-3）和对照细胞（Con1-3）之间基因具有显著性差异的热图Fig.3.2thermogramofsignificantdifferencebetweennaptreatment(nap1-3)andcontrolcell(con1-3)3.3.3GO功能注释分析分别将实验组含NAP和不含NAP两种样品的差异基因进行GO注释，并通过软件进行GO注释统计，根据意义的不同获得20个GO项，分为三类，如图3-3所示：生物过程组11项（绿色柱体）、细胞组7项（红色柱体）、分子功能组2项（蓝色柱体）。表3-2H1299细胞gene部分差异基因的GO富集结果Tab.3-2GOEnrichmentResultsofGenePartialDifferentialGenesinH1299CellsTermTypeGOTermGOIDD219numD219percentbiological_processmulticellularorganismalprocessGO:00325012020/219biological_processregulationofbiologicalprocessGO:00507893535/219biological_processgrowthGO:004000755/219biological_processreproductiveprocessGO:002241488/219biological_processresponsetostimulusGO:00508962222/219
【参考文献】：
期刊论文
[1]沙蚕蛋白酶的荧光标记及细胞摄取机制研究[J]. 杲亚许,丁国芳,杨最素,余方苗,黄芳芳,唐云平,陈艳,陈锐. 中国细胞生物学学报. 2019(02)
[2]沙蚕活性蛋白酶诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的机制研究[J]. 张国梅,杨最素,丁国芳,黄芳芳,赵玉勤. 现代食品科技. 2015(03)
[3]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对K562白血病细胞的抑制与损伤作用研究[J]. 薄其青,葛鑫,崔佳乐,姜雪,刘剑凯,洪敏. 中国生化药物杂志. 2012(06)
[4]一种新型具有纤溶活性的沙蚕金属蛋白酶的分离纯化及鉴定[J]. 邓志会,孙贺,林岩,王国忠,金莉,洪敏. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(08)
[5]沙蚕蛋白酶对血小板聚集及血液流变学的影响[J]. 白若伦,李奇,刘佳,姜曦,洪敏. 中国新药杂志. 2009(10)
[6]重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究[J]. 李荣贵,赵峰,杨宏,杜桂彩,汪靖超,王斌. 中国海洋药物. 2007(02)
[7]N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究[J]. 李奇,迟秀梅,石立红,王艳萍,洪敏. 中国药理学通报. 2006(08)
[8]溶栓素的分离纯化及特性测定[J]. 云龙,崔佳乐,付海英,刘继伟,李奇,洪敏. 中国生化药物杂志. 2005(01)
博士论文
[1]沙蚕纤溶蛋白酶的生化与分子生物学研究[D]. 张云龙.吉林大学 2007
硕士论文
[1]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ抗急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞作用与膜蛋白表达相关机制[D]. 张建一.吉林大学 2016
[2]酸性丝氨酸蛋白酶对淋巴细胞白血病Jurkat细胞的抑制作用及可能的机制[D]. 李春花.吉林大学 2015
[3]酸性丝氨酸蛋白酶抗白血病细胞作用机制的研究[D]. 姜雪.吉林大学 2014
[4]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ抑制急性髓细胞白血病NB4细胞的实验研究[D]. 葛鑫.吉林大学 2012
本文编号：3328002
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线流程图
表 3-1 RNA 纯度Tab.3-1 Purity of RNA胶图编号样品名称浓度(ng/μl)总量(μg)OD260/280OD260/230RIN 检测结果1H1299(空白组 1)737.80 10.31 2.00 1.72 8.10 A2H1299(空白组 2)735.00 9.97 1.90 1.67 8.80 A3H1299(30 μg/m LNAP 1)703.60 9.81 1.94 1.73 7.90 A4H1299(30 μg/m LNAP 2)660.40 7.21 1.92 1.72 9.30 A
第三章沙蚕蛋白酶对H1299细胞基因转录组的影响153.3.2Heatmap结果分析NAP处理H1299前后，有显著性差异表达的基因共有219个，如下图所示，选用红色、绿色和黑色来反映相对较高或较低的表达水平。图3-2NAP处理（NAP1-3）和对照细胞（Con1-3）之间基因具有显著性差异的热图Fig.3.2thermogramofsignificantdifferencebetweennaptreatment(nap1-3)andcontrolcell(con1-3)3.3.3GO功能注释分析分别将实验组含NAP和不含NAP两种样品的差异基因进行GO注释，并通过软件进行GO注释统计，根据意义的不同获得20个GO项，分为三类，如图3-3所示：生物过程组11项（绿色柱体）、细胞组7项（红色柱体）、分子功能组2项（蓝色柱体）。表3-2H1299细胞gene部分差异基因的GO富集结果Tab.3-2GOEnrichmentResultsofGenePartialDifferentialGenesinH1299CellsTermTypeGOTermGOIDD219numD219percentbiological_processmulticellularorganismalprocessGO:00325012020/219biological_processregulationofbiologicalprocessGO:00507893535/219biological_processgrowthGO:004000755/219biological_processreproductiveprocessGO:002241488/219biological_processresponsetostimulusGO:00508962222/219
【参考文献】：
期刊论文
[1]沙蚕蛋白酶的荧光标记及细胞摄取机制研究[J]. 杲亚许,丁国芳,杨最素,余方苗,黄芳芳,唐云平,陈艳,陈锐. 中国细胞生物学学报. 2019(02)
[2]沙蚕活性蛋白酶诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的机制研究[J]. 张国梅,杨最素,丁国芳,黄芳芳,赵玉勤. 现代食品科技. 2015(03)
[3]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ对K562白血病细胞的抑制与损伤作用研究[J]. 薄其青,葛鑫,崔佳乐,姜雪,刘剑凯,洪敏. 中国生化药物杂志. 2012(06)
[4]一种新型具有纤溶活性的沙蚕金属蛋白酶的分离纯化及鉴定[J]. 邓志会,孙贺,林岩,王国忠,金莉,洪敏. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(08)
[5]沙蚕蛋白酶对血小板聚集及血液流变学的影响[J]. 白若伦,李奇,刘佳,姜曦,洪敏. 中国新药杂志. 2009(10)
[6]重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究[J]. 李荣贵,赵峰,杨宏,杜桂彩,汪靖超,王斌. 中国海洋药物. 2007(02)
[7]N-V蛋白酶体内外纤维蛋白溶解活性的实验研究[J]. 李奇,迟秀梅,石立红,王艳萍,洪敏. 中国药理学通报. 2006(08)
[8]溶栓素的分离纯化及特性测定[J]. 云龙,崔佳乐,付海英,刘继伟,李奇,洪敏. 中国生化药物杂志. 2005(01)
博士论文
[1]沙蚕纤溶蛋白酶的生化与分子生物学研究[D]. 张云龙.吉林大学 2007
硕士论文
[1]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ抗急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞作用与膜蛋白表达相关机制[D]. 张建一.吉林大学 2016
[2]酸性丝氨酸蛋白酶对淋巴细胞白血病Jurkat细胞的抑制作用及可能的机制[D]. 李春花.吉林大学 2015
[3]酸性丝氨酸蛋白酶抗白血病细胞作用机制的研究[D]. 姜雪.吉林大学 2014
[4]酸性丝氨酸蛋白酶ASPNJ抑制急性髓细胞白血病NB4细胞的实验研究[D]. 葛鑫.吉林大学 2012
本文编号：3328002
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