ACT001通过抑制NFκB信号通路逆转乳腺癌他莫昔芬耐药的机制研究

发布时间：2021-08-11 18:37

　　研究目的:探讨NFκB信号通路抑制剂ACT001在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及机制。研究方法:选取MCF7、T47D以及ZR7530细胞系作为研究细胞。MTT法检测他莫昔芬、ACT001单药以及ACT001联合他莫昔芬对乳腺癌细胞增殖能力的抑制作用。二维克隆实验研究不同药物对细胞克隆形成能力的影响。慢病毒包被,导入荧光凋亡蛋白VC3AI,通过荧光显微镜观察绿色荧光来观察细胞凋亡情况。Annexin V-FITC/PI双染通过流式仪检测细胞凋亡率。慢病毒包被转导NFκB信号通路关键蛋白突变质粒（p CDH-CMV-IKBα（S32A,S262A）、p CDH-CMV-IKKβ（S177E,S181E））以及空载体（p CDH-CMV-VECTOR）,puro药筛构建NFκB信号通路持续激活以及NFκB信号通路持续抑制细胞系。Western Blot检测细胞内NFκB信号通路负相关蛋白IKBα表达水平。免疫荧光检测药物处理细胞后细胞内NFκB信号通路关键蛋白P65入核情况。实时荧光定量PCR检测他莫昔芬耐药细胞MCF7R/LCC9细胞内NFκB m RNA水平以及NFκB相关凋亡蛋白、抗凋... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

联合ACT001和他莫昔芬可以抑制细胞增殖以及克隆形成不同浓度他莫昔芬和ACT001单药或者联合处理T47D(a)、MCF7(b)和ZR7530（c）细胞48h；

27图 2 联合 ACT001 和他莫昔芬可促进细胞凋亡 分别用 10μM 他莫昔芬, 20 μMACT001 单药或者联合作用于 MCF7/VC3AI 和 ZR7530/VC3AI 细胞。荧光显微镜观察拍照（a）；选择同样的处理方式药物作用于 MCF7 和 T47D 细胞系，流式细胞仪检测细胞凋亡率（图 2b）。2.3 他莫昔芬可以激活 NFκB 信号通路有研究发现 NFκB 信号通路的活化参与激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药性的发生[29]。ACT001 可以有效抑制 NFκB 信号通路的活化，那么 NFκB 信号通路在他莫昔芬促细胞凋亡中发挥什么样的作用未见相关报道。为了证实 NFκB 信号通路在他莫昔芬耐药中发挥的具体作用，首先通过 Western Blot 检测验证他莫昔芬作用于乳腺癌细胞后细胞内 NFκB 信号通路负相关蛋白 IKBα表达量，研究结果表明，他莫昔芬处理乳腺癌细胞 48h 后细胞内 IKBα表达量下降（图 3b）。免

天津医科大学硕士学位论文 2. 结果疫荧光检测 P65 发现，他莫昔芬作用 48h 后细胞内 P65 入核增多，NFκB 信号路抑制剂 ACT001 联合他莫昔芬时，未见明显入核（图 3a）。实时荧光定量 P检测细胞 mRNA 水平提示，他莫昔芬作用后细胞内 NFκB mRNA 水平上升，联合 ACT001 细胞内 NFκB mRNA 水平上升不明显（图 3c-d）。


本文编号：3336681