高糖经内质网应激诱导肝细胞凋亡及其分子机制

发布时间：2021-08-15 02:41

　　目的 探讨高糖对肝癌细胞株HepG2细胞内质网应激、细胞凋亡的影响及其分子机制,并通过高脂饮食联合链脲佐菌素注射构建2型糖尿病（T2DM）模型大鼠探讨褪黑素和西格列汀对T2DM大鼠肝脏的保护作用。 方法 高糖培养HepG2细胞作为细胞模型：Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,caspase-3活性检测测定促凋亡蛋白caspase-3的活性,western blot检测凋亡相关蛋白procaspase-9、内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）相关蛋白（GRP78、CHOP、PERK）、氧化应激相关蛋白p47phox、MAPKs及ASK1的表达情况。HepG2细胞给予抗氧化剂α-硫辛酸、JNK和p38抑制剂（分别为SP600125、SB203580）2 h后联合40 mM葡萄糖刺激,Hoechst33258染色、western blot、细胞免疫荧光分别检测细胞凋亡、凋亡及ERS相关蛋白（Bcl-2、Grim19、GRP78）、CHOP的表达和定位情况。T2DM大鼠模型：37只SPF级雄性SD大鼠随机分配到正常对照（NC）、高脂对照（... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１高浓度葡萄糖诱导ＨｅｐＧ２细胞调亡??Ａ，?Ｂ，?Ｃ，?Ｄ，?Ｅ?和?Ｆ?葡萄糖浓度分别为?５．５，２５，４０，１００，１５０?和?２００

Ｐｒｏａｓｐａｓｅ－９是ｃａｓｐａｓｅ－９的前体蛋白，经自身裂解而活化。Ｗｅｓｔｅｒ凸ｂｌｏｔ检测结??果显示：随着葡萄糖浓度升高，ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－９蛋白水平遲漸降低，４０ｍＭ葡萄糖刺??激４８?ｈ后，ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ－９蛋白表达水平下降约４２％，见图３。??２１??

３．５高浓度葡萄糖对ＨｅｐＧ２细胞氧化应激相关蛋白ｐ４７ｐｈｏｘ表达的影响??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ结果显示高浓度荀萄糖刺激后，ＨｅｐＧ２细胞中氧化应激相关蛋白??ｐ４７ｐｈｏｘ表达量明思增加，且其表达呈葡萄糖浓度依赖性，见图５。此外Ｋａｒｔｈｉｋｅｙａｎ??也报告高糖经氧化应激诱导ＨｅｐＧ２细胞调亡，这些结果均说明高糖刺激下ＨｅｐＧ２??细胞发生了氧化应激ＰＷ。??１?２?３?４?５?６??］）４邮呪?－４６ｋＤａ??Ｍｉｎ?漏??５．５?２５?４１）?１００?１５０?２００?’??１．４「?Ｄ￣ｇｌｉ似）ｓｅ?（ｎｉＭ）??１．２?－?？？?ｔｆ??ｔｉｘＬｉｉｉ??１２?３?４?５?６??与细胞对照组比较；＊ｐ＜〇．〇５，＊＊ｐ＜０．０１??图５高浓度葡萄糖对ＨｅｐＧ２细胞氧化应激相关蛋白表达的影响??Ｆｉｇ?５?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎｖｏｌｖｅｄ?ｉｎ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ?ｓｔｒｅｓｓ?ｉｎ?ＨｅｐＧ２?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｏｓｅｄ?ｔｏ?ｈｉｇｈ?ｇｌｕｃｏｓｅ．??３．６高巧度葡萄糖对ＨｅｐＧ２细胞ＭＡＰＫ信号通路的影响??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?结果蟲示，高糖（２５，４０，１００，１５０，２００?ｍＭ）刺激?４８?ｈ?后，ｐ３８??和ＪＮＫ稱酸化水平明思上升，而ＥＲＫ礎酸化水平则保持稳定，未发生明思变化，??见图６ａ。因此，ｐ３８和ＪＮＫ信号通路可能参与高糖诱导的ＨｅｐＧ２细胞调亡。有研??巧表明，６民５可通过激活乂５反１拆８／脚１＾信号通路诱导细胞调亡１１３’１７’２５］

【参考文献】：
期刊论文
[1]检测人群胰岛素敏感性的一项新指数[J]. 李光伟,潘孝仁,Stephen Lillioja,Peter H. Bennett.  中华内科杂志. 1993 (10)

硕士论文
[1]高浓度葡萄糖诱导肝癌细胞株HepG2凋亡与内质网应激的关联及其相关机制的初步探讨[D]. 袁育珺.安徽医科大学 2012



本文编号：3343678