NTF3在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞的影响
发布时间：2021-08-16 00:23
目的:神经营养蛋白3（Neurotrophin 3,NTF3）在许多生物学过程中发挥作用,尤其是对于神经元细胞的存活与分化。但是,关于NTF3在实体肿瘤中的研究内容不多,目前也尚未有报道其在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中的作用。随着生物信息技术的不断更新与发展,这项研究通过大数据分析得到NTF3在肝癌中的表达量以及生存预后。对NTF3设置不同的表达水平进行体外实验,研究NTF3在HCC进展中的功能,并揭示了其潜在的分子机制。方法:通过对公开获取的肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库进行生物信息学分析,发现NTF3在肝癌组织及与其对应的癌旁组织中的表达量及预后相关性分析。取80例临床标本利用实时定量PCR（Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测技术用于验证NTF3在肝癌中的表达水平,同时将HCC组织的石蜡标本进行免疫组织化学研究（immunohistochemistry,IHC）用以察看NTF3的表达量。通过细胞计数试剂盒（C...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TCGA数据库分析NTF3在肝癌中的表达结果
青岛大学硕士学位论文18我们还可以从中分析显示，与正常组织相比肝细胞癌组织中NTF3的表达量（图1B）。从TCGA数据进行的生存分析表明，NTF3的低表达与HCC患者的低生存有关，而NTF3的高表达则延长了患者的生存（图1C）。然后，我们根据肿瘤细胞系百科全书（CancerCellLineEncyclopedia，CCLE）数据库查询到NTF3在多种肿瘤中的表达情况，结果显示，NTF3在肝癌组织中明显下调（见图2）。以上数据分析均表明，NTF3在肝癌组织中显著低表达。图2.CCLE数据库分析NTF3在多种肿瘤中的表达量1.2临床组织中验证NTF3在肝癌组织中表达下调然而，为了通过实验验证计算机模拟数据的准确性，我们收集了80例原发初治肝癌手术患者的临床样本及其相对应的癌旁组织，并通过qRT-PCR确定了HCC组织和与其对应的邻近非癌肝组织（adjacentnontumorouslivertissue，ANLT）中的NTF3mRNA的表达水平。数据显示与生物信息学分析结果一致，与ANLT相比，HCC组织中NTF3的表达水平显著降低（图3A）。接下来我们将通过IHC来进一步验证NTF3在样本组织中的表达情况。HCC和ANLT样品中NTF3染色的代表性图像（图3B）显示，在肝癌组织中可以观察到NTF3染色阴性，而与其对应的ANLT组织中NTF3表达染色阳性。qRT-PCR和IHC结果均表明NTF3在肝癌组织中表达下调。
结果19图3.NTF3在组织样本中的表达（A）实时定量PCR检测NTF3在肝癌组织标本及ANLT中的表达量（n=80）；（B）IHC检测NTF3在肝癌组织及其对应癌旁组织中的表达情况（n=80）。***代表P＜0.001。2.NTF3的体外表达及转染效率分析2.1NTF3在肝癌细胞系中的表达情况为了探索NTF3的生物学功能，将使用HCC细胞系进行体外实验。我们通过qRT-PCR测量了四种HCC细胞系（Huh7，SMMC-7721，HCCLM9和BEL-7402）和一种正常人肝细胞（HL-7702）中NTF3的mRNA表达水平。结果（见图4）表明，与正常肝细胞相比，在四种HCC细胞系中NTF3的表达显著下调。其中SMMC-7721细胞系中NTF3mRNA的表达量最低，而Huh-7细胞系中NTF3的表达水平最高。图4.NTF3在5种细胞系中的表达量2.2建立过表达/干扰细胞株及效率分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA m6A修饰及在肿瘤中的作用[J]. 孙洁,杨振坤,陆培华,吴兵. 南京医科大学学报(自然科学版). 2020(03)
[2]Indications of external radiotherapy for hepatocellular carcinoma from updated clinical guidelines: Diverse global viewpoints[J]. Sunmin Park,Won Sup Yoon,Chai Hong Rim. World Journal of Gastroenterology. 2020(04)
[3]肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断价值的研究进展[J]. 吴旭,孙航,吴传新. 现代医药卫生. 2018(04)
[4]循环肿瘤DNA在肝癌分子检测中的应用及研究进展[J]. 陈衍辉,王雅婷,杨博航,胡莹,张恒辉. 肝癌电子杂志. 2017(02)
[5]Hepatocellular carcinoma: Where are we?[J]. Roberto Mazzanti,Umberto Arena,Renato Tassi. World Journal of Experimental Medicine. 2016(01)
本文编号：3345208
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
TCGA数据库分析NTF3在肝癌中的表达结果
青岛大学硕士学位论文18我们还可以从中分析显示，与正常组织相比肝细胞癌组织中NTF3的表达量（图1B）。从TCGA数据进行的生存分析表明，NTF3的低表达与HCC患者的低生存有关，而NTF3的高表达则延长了患者的生存（图1C）。然后，我们根据肿瘤细胞系百科全书（CancerCellLineEncyclopedia，CCLE）数据库查询到NTF3在多种肿瘤中的表达情况，结果显示，NTF3在肝癌组织中明显下调（见图2）。以上数据分析均表明，NTF3在肝癌组织中显著低表达。图2.CCLE数据库分析NTF3在多种肿瘤中的表达量1.2临床组织中验证NTF3在肝癌组织中表达下调然而，为了通过实验验证计算机模拟数据的准确性，我们收集了80例原发初治肝癌手术患者的临床样本及其相对应的癌旁组织，并通过qRT-PCR确定了HCC组织和与其对应的邻近非癌肝组织（adjacentnontumorouslivertissue，ANLT）中的NTF3mRNA的表达水平。数据显示与生物信息学分析结果一致，与ANLT相比，HCC组织中NTF3的表达水平显著降低（图3A）。接下来我们将通过IHC来进一步验证NTF3在样本组织中的表达情况。HCC和ANLT样品中NTF3染色的代表性图像（图3B）显示，在肝癌组织中可以观察到NTF3染色阴性，而与其对应的ANLT组织中NTF3表达染色阳性。qRT-PCR和IHC结果均表明NTF3在肝癌组织中表达下调。
结果19图3.NTF3在组织样本中的表达（A）实时定量PCR检测NTF3在肝癌组织标本及ANLT中的表达量（n=80）；（B）IHC检测NTF3在肝癌组织及其对应癌旁组织中的表达情况（n=80）。***代表P＜0.001。2.NTF3的体外表达及转染效率分析2.1NTF3在肝癌细胞系中的表达情况为了探索NTF3的生物学功能，将使用HCC细胞系进行体外实验。我们通过qRT-PCR测量了四种HCC细胞系（Huh7，SMMC-7721，HCCLM9和BEL-7402）和一种正常人肝细胞（HL-7702）中NTF3的mRNA表达水平。结果（见图4）表明，与正常肝细胞相比，在四种HCC细胞系中NTF3的表达显著下调。其中SMMC-7721细胞系中NTF3mRNA的表达量最低，而Huh-7细胞系中NTF3的表达水平最高。图4.NTF3在5种细胞系中的表达量2.2建立过表达/干扰细胞株及效率分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA m6A修饰及在肿瘤中的作用[J]. 孙洁,杨振坤,陆培华,吴兵. 南京医科大学学报(自然科学版). 2020(03)
[2]Indications of external radiotherapy for hepatocellular carcinoma from updated clinical guidelines: Diverse global viewpoints[J]. Sunmin Park,Won Sup Yoon,Chai Hong Rim. World Journal of Gastroenterology. 2020(04)
[3]肿瘤标志物联合检测对原发性肝癌诊断价值的研究进展[J]. 吴旭,孙航,吴传新. 现代医药卫生. 2018(04)
[4]循环肿瘤DNA在肝癌分子检测中的应用及研究进展[J]. 陈衍辉,王雅婷,杨博航,胡莹,张恒辉. 肝癌电子杂志. 2017(02)
[5]Hepatocellular carcinoma: Where are we?[J]. Roberto Mazzanti,Umberto Arena,Renato Tassi. World Journal of Experimental Medicine. 2016(01)
本文编号：3345208
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