结直肠癌细胞分泌dickkopf相关蛋白2通过加速有氧糖酵解途径促进肿瘤血管生成的机制研究
发布时间：2021-08-18 07:12
研究背景和目的:结直肠癌（CRC）是全球发病率第三的恶性肿瘤,而肿瘤血管生成是肿瘤发生和转移的重要影响因素。血管内皮生长因子（VEGF）家族及其受体被认为是血管生成过程中最重要的调控因子。然而,临床上抗VEGF/VEGFR治疗的临床疗效并不理想,关于肿瘤血管生成的机制有待进一步研究阐明。方法:从8对非转移性和转移性人结直肠癌（CRC）组织基因表达谱的微阵列数据中筛选出Dickkopf相关蛋白2（DKK2）,并通过荧光定量PCR（qRT-PCR）、western blot技术检测新鲜结直肠癌患者标本中DKK2的表达水平。免疫荧光组织化学染色（IHC）检测CRC组织中DKK2的表达,分析其表达与临床病理参数间的关系。转染或干扰DKK2在结直肠癌细胞中的表达,应用CCK8细胞增殖实验、划痕愈合实验、transwell迁移实验、裸鼠皮下瘤模型观察DKK2对结直肠癌细胞体内外生长及转移的影响。鸡胚尿囊膜（CAM）实验和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）小管形成实验分别用于体外和体内血管生成的研究。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养基中的乳酸和葡萄糖的浓度。通过免疫共沉淀实验、免疫荧光共聚焦实验...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：123 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－４：免疫组化显示ＣＲＣ组织（Ｔ）及邻近正常黏膜（Ｎ）中ＤＫＫ２蛋白的表达情况，和ｎｍＣＲＣ??和ｍＣＲＣ组织中ＤＫＫ２蛋白的表达
进行?Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ?生存分析。以?ＤＫＫ２??在结直肠癌组织屮表达水平的中位数为分界点，将３５１例结直肠癌患者组织分??为ＤＫＫ２高表达组和Ｄ１ＣＫ２低表达组。分析结采显示：ＤＫＫ２的表达水平与患??者的性别和年龄没有明显相关性（Ｐ＞〇．０５）。而ＤＫＫ２与肿瘤原发范围、淋巴??结转移、远处转移、临床分期呈正相关。另外，我们还分析了病人的生存时间??包拈ＤＫＦＣ２高表达组和ＤＫＫ２低表达组，并制作生存曲线。发现高表达ＤＫＫ２??患者生存时间明显短ｒＤＫＫ２表达较低的患者（图１－５Ｂ；?Ｐ＜０．００１）。提示ＤＫＫ２??高表达与结貞肠癌患者＋良颅后密Ｗ扣关。??Ａ．?〇＞?ｐ＝ｏ．ｏｏｉ?Ｂ?ＧＳＥ８７２１１－ＧＰＬ１３４９７??｜?２５１?Ｉ?：?１??亏?Ｌｏｗ?ＤＫＫ２??－Ｄ?２０－?■?▲?ＨｉｇｈＤＫＫ２??ｆ?１５－?｜??１１〇．?！??Ｅ?？ｙ?１０．５－?Ｘ??１?５?？？?ｗ?Ｐ＜０．００１??ＪＳ?０?＿．??空?ｎｍＣＲＣ?ｍＣＲＣ?Ｓ??（ｎ＝８＞?（ｎ＝８）?〇?５０?ｉ〇〇?１５０??Ｍｏｎｔｈｓ??图１－５：在ｎｍＣＲＣ和ｍＣＲＣ组织中ＤＫＫ２?ＲＮＡ水平表达情况。??具有不同丨）ＫＫ２表达水平的ＣＲＣ患者的Ｋａｐ丨ａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲线和单因素变量分析。??（Ａ）ＤＫＫ２?ＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｎｍＣＲＣ?ａｎｄ?ｍＣＲＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ．??１９??
响，因此，主要参考蛋白免疫印??记实验结果筛选ＤＫＫ２在具有高转移潜能的ＳＷ６２０和ＬＳ１７４Ｔ细胞进行ＤＫＫ２??的敲低处理，而低表达ＤＫＫ２的ＲＫＯ和ＨＣＴ１１６细胞则用于后续实验的过表??达处理。在此我们猜测ＤＫＫ２高表达可能与结直肠癌的转移相关。??Ａ?｜?３－｜??１２－?－?＾?－?丁??ｉ?ＶＩＩ＇厂會ｉ？暑??巧丨％?＿國＿??？??ＤＫＫ２?＿？＿？?一。｜麵丨Ｉ?丨＿丨丨丨丨丨＂丨丨，：ｍｍｊ＾，一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?ｍｍ??图２－１：在ＮＣＭ４６０和７种不同的结直肠癌细胞系中检测到ＤＫＫ２?ｍＲＮＡ和蛋白的表达。??每条代表平均值士ＳＤ（ｉ它３）。??（Ａ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＤＫＫ２?ｍＲＮＡ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｉｎ?ＮＣＭ４６０?ａｎｄ?ｓｅｖｅｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ??ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．?Ｅａｃｈ?ｂａｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?±?ＳＤ?（ｎ＞３）．??（Ｂ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＤＫＫ２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｉｎ?ＮＣＭ４６０?ａｎｄ?ｅｉｇｈｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ??ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．??２．３．２构建ＤＫＫ２稳定过表达细胞株??通过山东維真公司成功构建ＤＫＫ２过表达腺病毒，载体带有卡那霉素抗性??和荧光素酶报告基因，经测序结果鉴定插入序列正确。首先用病毒感染ＤＫＫ２??蛋白含量较低的结直肠癌细胞系ＨＣＴ１１６和ＲＫＯ，通过卡那霉素进行筛选，未??感染或感染率较低的细胞出现死亡。通过荧光显微镜发现细胞胞内表达较
【参考文献】：
期刊论文
[1]A Brief Review on the Mechanisms of miRNA Regulation[J]. Yimei Cai,Xiaomin Yu,Songnian Hu,and Jun Yu Key Laboratory of Genome Sciences and Information,Beijing Institute of Genomics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100029,China.. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 2009(04)
本文编号：3349450
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：123 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－４：免疫组化显示ＣＲＣ组织（Ｔ）及邻近正常黏膜（Ｎ）中ＤＫＫ２蛋白的表达情况，和ｎｍＣＲＣ??和ｍＣＲＣ组织中ＤＫＫ２蛋白的表达
进行?Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ?生存分析。以?ＤＫＫ２??在结直肠癌组织屮表达水平的中位数为分界点，将３５１例结直肠癌患者组织分??为ＤＫＫ２高表达组和Ｄ１ＣＫ２低表达组。分析结采显示：ＤＫＫ２的表达水平与患??者的性别和年龄没有明显相关性（Ｐ＞〇．０５）。而ＤＫＫ２与肿瘤原发范围、淋巴??结转移、远处转移、临床分期呈正相关。另外，我们还分析了病人的生存时间??包拈ＤＫＦＣ２高表达组和ＤＫＫ２低表达组，并制作生存曲线。发现高表达ＤＫＫ２??患者生存时间明显短ｒＤＫＫ２表达较低的患者（图１－５Ｂ；?Ｐ＜０．００１）。提示ＤＫＫ２??高表达与结貞肠癌患者＋良颅后密Ｗ扣关。??Ａ．?〇＞?ｐ＝ｏ．ｏｏｉ?Ｂ?ＧＳＥ８７２１１－ＧＰＬ１３４９７??｜?２５１?Ｉ?：?１??亏?Ｌｏｗ?ＤＫＫ２??－Ｄ?２０－?■?▲?ＨｉｇｈＤＫＫ２??ｆ?１５－?｜??１１〇．?！??Ｅ?？ｙ?１０．５－?Ｘ??１?５?？？?ｗ?Ｐ＜０．００１??ＪＳ?０?＿．??空?ｎｍＣＲＣ?ｍＣＲＣ?Ｓ??（ｎ＝８＞?（ｎ＝８）?〇?５０?ｉ〇〇?１５０??Ｍｏｎｔｈｓ??图１－５：在ｎｍＣＲＣ和ｍＣＲＣ组织中ＤＫＫ２?ＲＮＡ水平表达情况。??具有不同丨）ＫＫ２表达水平的ＣＲＣ患者的Ｋａｐ丨ａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲线和单因素变量分析。??（Ａ）ＤＫＫ２?ＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｎｍＣＲＣ?ａｎｄ?ｍＣＲＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ．??１９??
响，因此，主要参考蛋白免疫印??记实验结果筛选ＤＫＫ２在具有高转移潜能的ＳＷ６２０和ＬＳ１７４Ｔ细胞进行ＤＫＫ２??的敲低处理，而低表达ＤＫＫ２的ＲＫＯ和ＨＣＴ１１６细胞则用于后续实验的过表??达处理。在此我们猜测ＤＫＫ２高表达可能与结直肠癌的转移相关。??Ａ?｜?３－｜??１２－?－?＾?－?丁??ｉ?ＶＩＩ＇厂會ｉ？暑??巧丨％?＿國＿??？??ＤＫＫ２?＿？＿？?一。｜麵丨Ｉ?丨＿丨丨丨丨丨＂丨丨，：ｍｍｊ＾，一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｍｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍ?ｍｍ??图２－１：在ＮＣＭ４６０和７种不同的结直肠癌细胞系中检测到ＤＫＫ２?ｍＲＮＡ和蛋白的表达。??每条代表平均值士ＳＤ（ｉ它３）。??（Ａ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＤＫＫ２?ｍＲＮＡ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｉｎ?ＮＣＭ４６０?ａｎｄ?ｓｅｖｅｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ??ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．?Ｅａｃｈ?ｂａｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ｔｈｅ?ｍｅａｎ?±?ＳＤ?（ｎ＞３）．??（Ｂ）?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＤＫＫ２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｉｎ?ＮＣＭ４６０?ａｎｄ?ｅｉｇｈｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ??ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ．??２．３．２构建ＤＫＫ２稳定过表达细胞株??通过山东維真公司成功构建ＤＫＫ２过表达腺病毒，载体带有卡那霉素抗性??和荧光素酶报告基因，经测序结果鉴定插入序列正确。首先用病毒感染ＤＫＫ２??蛋白含量较低的结直肠癌细胞系ＨＣＴ１１６和ＲＫＯ，通过卡那霉素进行筛选，未??感染或感染率较低的细胞出现死亡。通过荧光显微镜发现细胞胞内表达较
【参考文献】：
期刊论文
[1]A Brief Review on the Mechanisms of miRNA Regulation[J]. Yimei Cai,Xiaomin Yu,Songnian Hu,and Jun Yu Key Laboratory of Genome Sciences and Information,Beijing Institute of Genomics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100029,China.. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 2009(04)
本文编号：3349450
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