ADAMTS8对人结直肠癌细胞生长的抑制作用及机制研究

发布时间：2021-08-19 18:16

　　背景:结直肠癌因其高发病率和高死亡率对人类健康构成巨大威胁。先前的研究表明,隶属于锌金属蛋白酶家族的ADAMTS8在多种肿瘤中受启动子异常甲基化调控而表达下调,并在这些肿瘤中发挥着抑癌因子的作用,但其在结直肠癌中的功能仍然未知。方法:1.采用RT-PCR和qPCR法检测结直肠癌细胞系和原发性结直肠癌肿瘤组织中ADAMTS8的表达水平;2.利用CCK-8增殖实验,克隆形成实验,流式细胞术以及Transwell实验体外评估结直肠癌细胞系在ADAMTS8影响下的生物学功能变化情况,并通过裸鼠皮下成瘤实验进行体内验证;3.蛋白质免疫印迹技术用于探讨ADAMTS8在结直肠癌中的作用机制。结果:我们发现:1.mRNA水平上的ADAMTS8在结直肠癌细胞系中沉默（6/7）,另外在与邻近癌旁组织相比时,其在对应的原发肿瘤组织中表达显著下调。DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（Aza）可使LoVo细胞系中的ADAMTS8恢复表达;2.ADAMTS8的过表达抑制细胞增殖并诱导凋亡。此外,ADAMTS8抑制细胞迁移和侵袭,并诱导细胞周期阻滞在G2/M期;3.ADAMTS8的过表达导致p-GSK3... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ADAMTS8在结直肠癌组织中的表达Figure1.1ExpressionofADAMTS8inCRCtissuesA)UALCANdatabase；B)GEPIA；C)qRT-PCR

重庆医科大学硕士研究生学位论文23ADAMTS8的表达，其余6种细胞系中的ADAMTS8均被沉默（图1.2）。图1.2RT-PCR检测ADAMTS8在结直肠癌细胞系中的表达Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo细胞系中的ADAMTS8表达下调可通过去甲基化药物恢复为初步探寻人结直肠癌细胞系中ADAMTS8沉默的原因，我们在LoVo细胞系中进行了A+T实验，即Aza和TSA的联合处理。我们发现去甲基化可使ADAMTS8的表达恢复（图3）。图1.3Aza和TSA可使LoVo细胞系中ADAMTS8的表达恢复Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在结直肠癌细胞中的生物学作用3.2.1ADAMTS8过表达稳定株的构建通过转染质粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）构建过表达ADAMTS8的结直肠癌稳定株（HCT116、HT-29），同时转染空白质粒（pcDNA3.1）作为对照。我们

重庆医科大学硕士研究生学位论文23ADAMTS8的表达，其余6种细胞系中的ADAMTS8均被沉默（图1.2）。图1.2RT-PCR检测ADAMTS8在结直肠癌细胞系中的表达Figure1.2ExpressionofADAMTS8inCRCcelllines3.1.3LoVo细胞系中的ADAMTS8表达下调可通过去甲基化药物恢复为初步探寻人结直肠癌细胞系中ADAMTS8沉默的原因，我们在LoVo细胞系中进行了A+T实验，即Aza和TSA的联合处理。我们发现去甲基化可使ADAMTS8的表达恢复（图3）。图1.3Aza和TSA可使LoVo细胞系中ADAMTS8的表达恢复Figure1.3RestorationofADAMTS8expressionbyAZA,TSAinLoVocellline3.2ADAMTS8在结直肠癌细胞中的生物学作用3.2.1ADAMTS8过表达稳定株的构建通过转染质粒（pcDNA3.1-Flag-ADAMTS8）构建过表达ADAMTS8的结直肠癌稳定株（HCT116、HT-29），同时转染空白质粒（pcDNA3.1）作为对照。我们

【参考文献】：
期刊论文
[1]Overall expression of beta-catenin outperforms its nuclear accumulation in predicting outcomes of colorectal cancers[J]. Worrawit Wanitsuwan,Samornmas Kanngurn,Teeranut Boonpipattanapong,Rassamee Sangthong,Surasak Sangkhathat.  World Journal of Gastroenterology. 2008(39)



本文编号：3351902