Klotho对衰老间质细胞和结直肠癌细胞CCL-2分泌的抑制作用及其机制研究
发布时间：2021-08-28 14:31
研究背景与目的结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,据报道全球每年CRC新发病例高达136万,死亡病例约达69万,严重危害人类健康。寻找结直肠癌发生发展的关键分子及其相互关系,进一步阐明结直肠癌的发病机制具有重要的意义。结直肠癌发病随着年龄的增长,发病风险增加。近年研究发现细胞衰老可能影响周围微环境促进肿瘤的发生。该微环境是由成纤维细胞、内皮细胞、免疫细胞和肿瘤周围的细胞外基质等共同构成的复杂网络。Klotho是由Kuro-o等在1997年发现的一种衰老相关多功能蛋白,其在生物整体抗衰老和延长寿命方面的作用广受关注。Klotho基因表达下降与寿命缩短、动脉硬化、心脑血管等疾病的发生相关。近年来人们发现在一些肿瘤组织中也存在Klotho低表达现象,提示Klotho基因可能参与肿瘤调控。我们前期利用基因芯片筛选,发现Klotho基因受到表观遗传调控,在结肠癌细胞中低表达与启动子DNA高甲基化有关。本研究将进一步阐明Klotho在结直肠癌发生发展中的临床价值和重要生物学功能,探讨Klotho对间质细胞衰老和衰老相关分泌表型的表达调控和作用机制...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１结直肠癌配对组织中Ｋｌｏｔｈｏ免疫组化镜下表现及评分??注：放大倍数：Ａ，?Ｂ：光学显微镜２０〇ｘ??
部位主要在间质细胞中，在结直肠上皮细胞中也有一定程度的表达。染色阳性呈??棕黄色颗粒状，不同的组织中染色程度不同，提示表达的强度不同。与对应的癌??旁配对组织相比，Ｋｌｏｔｈｏ在结直肠癌组织中染色明显变浅，阳性率降低（图１．１Ａ??和Ｂ）；免疫组化Ｋｌｏｔｈｏ表达评分统计结果显示结直肠癌组织评分（２．６５土２．６１）??显著低于癌旁配对组织（４．８８±４．２３）（图１．１Ｃ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ??Ｖ?■：丨??＾?□?Ｔ??Ｊ｜?，ｒ－?，?■??Ａｄｊａｃｅｎｔ?ｎｏｒｍａｌ?Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ?〇Ｊ?＇?＇???Ｎｏｒｍａｌ?Ｔｕｍｏｕｒ??图１．１结直肠癌配对组织中Ｋｌｏｔｈｏ免疫组化镜下表现及评分??注：放大倍数：Ａ，?Ｂ：光学显微镜２０〇ｘ??２．３?Ｋｌｏｔｈｏ蛋白表达水平与结直肠癌患者各临床病理参数之间的相关性??我们进一步对Ｋｌｏｔｈｏ蛋白的表达情况与患者的临床病理资料进行了相关性分??１１??
两种常见细胞［３６’３７］。在本部分研究中，我们构建这两种细胞的复制性细胞衰老模??型，发现细胞形态变平，体积变大以及ＳＡ－Ｐ－ｇａｌ阳性染色增加提示了这两种细胞??随着传代过程而出现了衰老（图２．１Ａ和图２．２Ａ）。我们还运用目前广泛认可的ＤＮＡ??损伤诱导的体外衰老细胞模型来进一步验证，分别以阿霉素５０ｎｍｏｌ／Ｌ和８０ｎｍｏｌ／Ｌ??处理年轻ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８细胞，药物诱导的实验组中ＳＡ－ｐ－ｇａｌ阳性细胞比例较??未加药处理组明显上升（图２．１Ａ、Ｂ和图２．２Ａ、Ｂ）。实时荧光定量ＰＣＲ技术和??Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测上述细胞中的衰老标志分子Ｐ５３、Ｐ２１的表达水平，结果发??现：随着细胞的传代，Ｐ２１、Ｐ５３的表达明显上升；相比于对照组，药物诱导的实??验组中Ｐ２１、Ｐ５３的表达水平亦显著升高（图２．１Ｃ和Ｄ、图２．２Ｃ和Ｄ）。本研究??成功构建了?ＨＵＶＥＣ、ＷＩ－３８两种细胞的两种衰老模型（复制性和阿霉素诱导的衰??老模型）。??２．１．２?Ｋｌｏｔｈｏ对细胞衰老的影响??Ｋｌｏｔｈｏ是一个衰老相关蛋白，Ｋｌｏｔｈｏ基因缺陷的小鼠会出现一系列与人类衰??老相似的行为和病理变化［８］。我们提取了年轻的和衰老的（包括复制性衰老和阿霉??素诱导衰老）ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８细胞的总ＲＮＡ和蛋白，结果发现随着细胞衰老，??Ｋｌｏｔｈｏ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均下降，提示Ｋｌｏｔｈｏ与细胞衰老相关（图２．１Ｃ和Ｄ??和图２．２Ｃ和Ｄ）。??我们利用人重组Ｋｌｏｔｈｏ蛋白预处理上述两种年轻细胞后再予阿霉素诱导衰??老。结果发现
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,左婷婷,贾漫漫,夏昌发,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2016(01)
[2]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[3]衰老及相关疾病细胞分子机制研究进展[J]. 刘俊平. 生物化学与生物物理进展. 2014(03)
[4]Klotho is a serum factor related to human aging[J]. 肖能明,张焱明,郑权,顾军. Chinese Medical Journal. 2004(05)
[5]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,. Cell Research. 2002(Z1)
[6]结直肠癌趋化因子单核细胞超化蛋白-1的表达[J]. 杨春康,陈道达,许东坡,田源,张景辉. 中华消化杂志. 2002(10)
本文编号：3368691
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１结直肠癌配对组织中Ｋｌｏｔｈｏ免疫组化镜下表现及评分??注：放大倍数：Ａ，?Ｂ：光学显微镜２０〇ｘ??
部位主要在间质细胞中，在结直肠上皮细胞中也有一定程度的表达。染色阳性呈??棕黄色颗粒状，不同的组织中染色程度不同，提示表达的强度不同。与对应的癌??旁配对组织相比，Ｋｌｏｔｈｏ在结直肠癌组织中染色明显变浅，阳性率降低（图１．１Ａ??和Ｂ）；免疫组化Ｋｌｏｔｈｏ表达评分统计结果显示结直肠癌组织评分（２．６５土２．６１）??显著低于癌旁配对组织（４．８８±４．２３）（图１．１Ｃ）。??Ａ?Ｂ?Ｃ??Ｖ?■：丨??＾?□?Ｔ??Ｊ｜?，ｒ－?，?■??Ａｄｊａｃｅｎｔ?ｎｏｒｍａｌ?Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ?ｃａｎｃｅｒ?〇Ｊ?＇?＇???Ｎｏｒｍａｌ?Ｔｕｍｏｕｒ??图１．１结直肠癌配对组织中Ｋｌｏｔｈｏ免疫组化镜下表现及评分??注：放大倍数：Ａ，?Ｂ：光学显微镜２０〇ｘ??２．３?Ｋｌｏｔｈｏ蛋白表达水平与结直肠癌患者各临床病理参数之间的相关性??我们进一步对Ｋｌｏｔｈｏ蛋白的表达情况与患者的临床病理资料进行了相关性分??１１??
两种常见细胞［３６’３７］。在本部分研究中，我们构建这两种细胞的复制性细胞衰老模??型，发现细胞形态变平，体积变大以及ＳＡ－Ｐ－ｇａｌ阳性染色增加提示了这两种细胞??随着传代过程而出现了衰老（图２．１Ａ和图２．２Ａ）。我们还运用目前广泛认可的ＤＮＡ??损伤诱导的体外衰老细胞模型来进一步验证，分别以阿霉素５０ｎｍｏｌ／Ｌ和８０ｎｍｏｌ／Ｌ??处理年轻ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８细胞，药物诱导的实验组中ＳＡ－ｐ－ｇａｌ阳性细胞比例较??未加药处理组明显上升（图２．１Ａ、Ｂ和图２．２Ａ、Ｂ）。实时荧光定量ＰＣＲ技术和??Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测上述细胞中的衰老标志分子Ｐ５３、Ｐ２１的表达水平，结果发??现：随着细胞的传代，Ｐ２１、Ｐ５３的表达明显上升；相比于对照组，药物诱导的实??验组中Ｐ２１、Ｐ５３的表达水平亦显著升高（图２．１Ｃ和Ｄ、图２．２Ｃ和Ｄ）。本研究??成功构建了?ＨＵＶＥＣ、ＷＩ－３８两种细胞的两种衰老模型（复制性和阿霉素诱导的衰??老模型）。??２．１．２?Ｋｌｏｔｈｏ对细胞衰老的影响??Ｋｌｏｔｈｏ是一个衰老相关蛋白，Ｋｌｏｔｈｏ基因缺陷的小鼠会出现一系列与人类衰??老相似的行为和病理变化［８］。我们提取了年轻的和衰老的（包括复制性衰老和阿霉??素诱导衰老）ＨＵＶＥＣ和ＷＩ－３８细胞的总ＲＮＡ和蛋白，结果发现随着细胞衰老，??Ｋｌｏｔｈｏ的ｍＲＮＡ和蛋白水平均下降，提示Ｋｌｏｔｈｏ与细胞衰老相关（图２．１Ｃ和Ｄ??和图２．２Ｃ和Ｄ）。??我们利用人重组Ｋｌｏｔｈｏ蛋白预处理上述两种年轻细胞后再予阿霉素诱导衰??老。结果发现
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,左婷婷,贾漫漫,夏昌发,邹小农,赫捷. 中国肿瘤. 2016(01)
[2]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He. Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[3]衰老及相关疾病细胞分子机制研究进展[J]. 刘俊平. 生物化学与生物物理进展. 2014(03)
[4]Klotho is a serum factor related to human aging[J]. 肖能明,张焱明,郑权,顾军. Chinese Medical Journal. 2004(05)
[5]Senescence-like changes induced by expression of p21Waf1/Cip1 in NIH3T3 cell line[J]. XI CHEN1, WEI ZHANG2, YUN FEI GAO1, XIAO QIN SU1, ZHONG HE ZHAI1,*1 College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China2 The Key Laboratory of Cell Proliferation and Regulation Biology of the Ministry of Education, College of Life Sciences,. Cell Research. 2002(Z1)
[6]结直肠癌趋化因子单核细胞超化蛋白-1的表达[J]. 杨春康,陈道达,许东坡,田源,张景辉. 中华消化杂志. 2002(10)
本文编号：3368691
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