RNA编辑型AZIN1促进结直肠肿瘤血管新生的作用及机制研究
发布时间：2021-08-29 20:40
目的:血管新生（angiogenesis）在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。在肿瘤形成早期,肿瘤直径超过2-3mm时,就必须生成血管来维持氧气和营养物质的输送。肿瘤的血管表现为孔隙多,表面粗糙,细胞间连接松散,使得肿瘤血管通透性增强,有利于肿瘤细胞的血道转移,且在肿瘤周围形成特殊的微环境。目前,抑制肿瘤血管新生的靶向药物被成功研发并广泛应用于临床,并取得较好的治疗效果。但是也出现了药物副反应、药效低、耐药等一系列问题。因此,探寻其他潜在的可作为抗肿瘤血管新生治疗靶点的分子就显得尤为重要。RNA编辑（RNA editing）是一种重要的转录后调节机制,发生A到I的RNA编辑的抗酶抑制因子1（antizyme inhibitor1,AZIN1）参与调控肿瘤发生发展的多种生物学行为。本文拟通过体内外实验阐明RNA编辑型AZIN1在肿瘤血管新生中的作用和机制。研究方法:1、采用Real-time PCR检测结直肠癌细胞系中AZIN1的表达。2、构建质粒,包装慢病毒,用慢病毒感染HCT 116和HT-29细胞,构建稳定转染野生型和编辑型AZIN1及对照的HCT 116和HT-29细胞系,用嘌呤霉...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-qPCR实验检测结直肠癌细胞系中AZIN1的表达情况
中国医科大学硕士学位论文15的表达情况。Westernblot结果显示，野生型和编辑型组细胞中V5的表达均升高，且表达量相近（图2A）。RT-qPCR结果显示编辑型组细胞中的编辑型与野生型AZIN1的mRNA水平的比值明显升高（图2B）。结果显示过表达结果可靠，稳转细胞系建立成功，可进行后续实验。图2（A）通过Westernblot实验检测HCT116和HT-29两组稳转细胞系中V5的表达情况，GADPH作为内参。（B）通过RT-qPCR实验检测HCT116和HT-29两组稳转细胞系中编辑型、野生型AZIN1的表达情况，GADPH作为内参。3.3编辑型AZIN1对HUVEC的调节作用3.3.1编辑型AZIN1促进HUVEC的迁移成管能力为探究结直肠癌细胞中编辑型AZIN1对血管内皮细胞迁移成管能力的影响，我
中国医科大学硕士学位论文18图4CCK-8检测各组条件培养基对HUVEC增殖能力的影响。（***P<0.001）3.4编辑型AZIN1在体内促进血管形成和肿瘤增殖3.4.1编辑型AZIN1移植瘤生长速度显著加快我们采用荷瘤实验检测过表达编辑型AZIN1的肿瘤细胞在体内对血管形成的调控作用以及肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用。裸鼠两侧腋下接种HCT116细胞和HCT116与HUVEC混合液成功成瘤后，定期测量小鼠肿瘤体积，观察至适当时间（肿瘤体积超过2cm3或者小鼠出现消瘦、恶病质等体征）终止成瘤实验。结果显示，过表达RNA编辑型AZIN1的HCT116组具有更强的成瘤能力，肿瘤体积明显大于野生型和对照组（图5A）。而且，编辑型肿瘤细胞与内皮细胞混合接种的移植瘤体积明显大于野生混合组和对照混合接种组的移植瘤体积（图5B）。图5（A）单独接种肿瘤细胞各组裸鼠移植瘤增长曲线。（B）混合接种组移植瘤增长曲线。（n=10，*P<0.05，**P<0.01）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Polymorphisms of AZIN1 rs2679757 and TRPM5 rs886277 are Associated with Cirrhosis Risk in Chinese Patients with Chronic Hepatitis B[J]. Li-jun Peng,Jin-sheng Guo,Zhe Zhang,Li-li Liu,Yi-rong Cao,Hong Shi,Jian Wang,Scott L.Friedman,John J.Sninsky,Ji-yao Wang. Infection International（Electronic Edition）. 2012(02)
本文编号：3371347
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-qPCR实验检测结直肠癌细胞系中AZIN1的表达情况
中国医科大学硕士学位论文15的表达情况。Westernblot结果显示，野生型和编辑型组细胞中V5的表达均升高，且表达量相近（图2A）。RT-qPCR结果显示编辑型组细胞中的编辑型与野生型AZIN1的mRNA水平的比值明显升高（图2B）。结果显示过表达结果可靠，稳转细胞系建立成功，可进行后续实验。图2（A）通过Westernblot实验检测HCT116和HT-29两组稳转细胞系中V5的表达情况，GADPH作为内参。（B）通过RT-qPCR实验检测HCT116和HT-29两组稳转细胞系中编辑型、野生型AZIN1的表达情况，GADPH作为内参。3.3编辑型AZIN1对HUVEC的调节作用3.3.1编辑型AZIN1促进HUVEC的迁移成管能力为探究结直肠癌细胞中编辑型AZIN1对血管内皮细胞迁移成管能力的影响，我
中国医科大学硕士学位论文18图4CCK-8检测各组条件培养基对HUVEC增殖能力的影响。（***P<0.001）3.4编辑型AZIN1在体内促进血管形成和肿瘤增殖3.4.1编辑型AZIN1移植瘤生长速度显著加快我们采用荷瘤实验检测过表达编辑型AZIN1的肿瘤细胞在体内对血管形成的调控作用以及肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用。裸鼠两侧腋下接种HCT116细胞和HCT116与HUVEC混合液成功成瘤后，定期测量小鼠肿瘤体积，观察至适当时间（肿瘤体积超过2cm3或者小鼠出现消瘦、恶病质等体征）终止成瘤实验。结果显示，过表达RNA编辑型AZIN1的HCT116组具有更强的成瘤能力，肿瘤体积明显大于野生型和对照组（图5A）。而且，编辑型肿瘤细胞与内皮细胞混合接种的移植瘤体积明显大于野生混合组和对照混合接种组的移植瘤体积（图5B）。图5（A）单独接种肿瘤细胞各组裸鼠移植瘤增长曲线。（B）混合接种组移植瘤增长曲线。（n=10，*P<0.05，**P<0.01）
【参考文献】：
期刊论文
[1]Polymorphisms of AZIN1 rs2679757 and TRPM5 rs886277 are Associated with Cirrhosis Risk in Chinese Patients with Chronic Hepatitis B[J]. Li-jun Peng,Jin-sheng Guo,Zhe Zhang,Li-li Liu,Yi-rong Cao,Hong Shi,Jian Wang,Scott L.Friedman,John J.Sninsky,Ji-yao Wang. Infection International（Electronic Edition）. 2012(02)
本文编号：3371347
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