ΔNp63α在头颈鳞状细胞癌中对硼替佐米耐药的作用及机制研究
发布时间：2021-09-11 11:14
研究背景及目的头颈癌是指一组发生在包括口腔、口咽、下咽、喉等部位的恶性肿瘤。根据2018GLOBECAN的统计,仅2018年全球就有705781例新发头颈癌病例,并有358144例患者死于头颈癌,分别占全身恶性肿瘤发病率的3.9%和死亡率的3.7%。我们常将头颈部不同部位但有相同病理来源的肿瘤作为一类疾病进行研究,而头颈鳞状细胞癌是其中发生率最高的一类。我国目前有超过50%的头颈鳞状细胞癌患者在就诊时已发生局部转移或者处于临床晚期,对于这部分患者传统治疗方式没有增加他们的长期生存率。小分子靶向药日益成为重要的辅助治疗手段。它能够特异性的识别并杀伤肿瘤细胞,有潜在的应用前景。在过去的十几年中,蛋白酶体抑制剂在血液系统恶性肿瘤治疗中的应用已大大扩展,2003年硼替佐米（万珂）被FDA批准用于复发性多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤治疗,至今它已在骨髓瘤和小儿/成人急性白血病患者的疗效上取得重大进步,但是在头颈肿瘤等实体瘤的治疗上却进展缓慢。导致这一结果的原因很多,实体肿瘤细胞内固有的耐药机制可能是其最主要的原因。一般来说,细胞内的某些蛋白质的突变,过表达或者持续性激活都可能会促使耐药产生。这些蛋白...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
硼替佐米作用头颈鳞癌细胞株24小时，通过CCK8法检测细胞毒性（二）ΔNp63α在头颈鳞癌细胞株中的表达
ΔNp63α在头颈鳞状细胞癌中对硼替佐米耐药的作用及机制研究-23-图1.1硼替佐米作用头颈鳞癌细胞株24小时，通过CCK8法检测细胞毒性（二）ΔNp63α在头颈鳞癌细胞株中的表达ΔNp63α在四株头颈鳞癌细胞株中均有表达，根据Western-Blot检测结果发现各株表达量高低有明显差异。依据灰度值表达量由高到低依次为：HN31、UM-SCC-11、UM-SCC-17A和UM-SCC-17B，其中HN31和UM-SCC-11相较于UM-SCC-17A和UM-SCC-17B明显高表达（见图1.2）。细胞免疫荧光检测提示，ΔNp63α高表达于细胞核内，荧光强度依次由强到弱依次为：HN31、UM-SCC-11、UM-SCC-17A和UM-SCC-17B，和Western-Blot结果趋势一致（见图1.3）。图1.2Western-Blot检测四株头颈鳞癌细胞株ΔNp63α蛋白表达。
海军军医大学博士学位论文-24-图1.3四株头颈鳞癌细胞株免疫荧光检测ΔNp63α蛋白的表达及分布，荧光场400倍镜下观察（绿色荧光为ΔNp63α，蓝色荧光为DAPI）。上述四株头颈鳞状细胞癌的ΔNp63α表达量和硼替佐米药物敏感性有明显的对应关系：ΔNp63α表达量高的细胞株（HN31和UM-SCC-11）对硼替佐米相对耐药，Np63α表达量低的细胞株（UM-SCC-17A和UM-SCC-17B）对硼替佐米相对敏感。（三）相对敏感株UM-SCC-17B逐步诱导耐药经过大约240天逐步诱导耐药培养，培养出能在含有10nM硼替佐米培养基中正常传代、增殖的耐药细胞株17B-R-10nM。耐药株17B-R-10nM形态特征为鹅卵石样，大小不一，排列无序，易聚团生长，而亲本株UM-SCC-17B排列规则，大小较均一，如蜂房一般生长（如图1.4）。无药培养两周后测得其IC50为：412.9nM（如图1.5）。根据耐药指数=耐药株IC50/亲本株IC50，我们得到的头颈鳞状细胞癌诱导耐药株的耐药指数为113。图1.4左图为亲本组UM-SCC-17B，右图耐药株17B-R-10nM，均在光镜下400倍镜下观察。
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白质组学研究进展及在头颈肿瘤标志物筛选中的应用[J]. 程磊,周梁. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2006(01)
本文编号：3392898
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：108 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
硼替佐米作用头颈鳞癌细胞株24小时，通过CCK8法检测细胞毒性（二）ΔNp63α在头颈鳞癌细胞株中的表达
ΔNp63α在头颈鳞状细胞癌中对硼替佐米耐药的作用及机制研究-23-图1.1硼替佐米作用头颈鳞癌细胞株24小时，通过CCK8法检测细胞毒性（二）ΔNp63α在头颈鳞癌细胞株中的表达ΔNp63α在四株头颈鳞癌细胞株中均有表达，根据Western-Blot检测结果发现各株表达量高低有明显差异。依据灰度值表达量由高到低依次为：HN31、UM-SCC-11、UM-SCC-17A和UM-SCC-17B，其中HN31和UM-SCC-11相较于UM-SCC-17A和UM-SCC-17B明显高表达（见图1.2）。细胞免疫荧光检测提示，ΔNp63α高表达于细胞核内，荧光强度依次由强到弱依次为：HN31、UM-SCC-11、UM-SCC-17A和UM-SCC-17B，和Western-Blot结果趋势一致（见图1.3）。图1.2Western-Blot检测四株头颈鳞癌细胞株ΔNp63α蛋白表达。
海军军医大学博士学位论文-24-图1.3四株头颈鳞癌细胞株免疫荧光检测ΔNp63α蛋白的表达及分布，荧光场400倍镜下观察（绿色荧光为ΔNp63α，蓝色荧光为DAPI）。上述四株头颈鳞状细胞癌的ΔNp63α表达量和硼替佐米药物敏感性有明显的对应关系：ΔNp63α表达量高的细胞株（HN31和UM-SCC-11）对硼替佐米相对耐药，Np63α表达量低的细胞株（UM-SCC-17A和UM-SCC-17B）对硼替佐米相对敏感。（三）相对敏感株UM-SCC-17B逐步诱导耐药经过大约240天逐步诱导耐药培养，培养出能在含有10nM硼替佐米培养基中正常传代、增殖的耐药细胞株17B-R-10nM。耐药株17B-R-10nM形态特征为鹅卵石样，大小不一，排列无序，易聚团生长，而亲本株UM-SCC-17B排列规则，大小较均一，如蜂房一般生长（如图1.4）。无药培养两周后测得其IC50为：412.9nM（如图1.5）。根据耐药指数=耐药株IC50/亲本株IC50，我们得到的头颈鳞状细胞癌诱导耐药株的耐药指数为113。图1.4左图为亲本组UM-SCC-17B，右图耐药株17B-R-10nM，均在光镜下400倍镜下观察。
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白质组学研究进展及在头颈肿瘤标志物筛选中的应用[J]. 程磊,周梁. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2006(01)
本文编号：3392898
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