胃癌腹水来源的肿瘤类器官的培养及腹水促类器官生长机制的初步研究
发布时间：2021-09-11 17:45
研究背景和目的:胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分别占所有恶性肿瘤的第2位和第3位,晚期比例高达80%,5年生存率不足10%。胃癌腹膜转移及其合并的恶性腹水是胃癌患者的主要死因之一。目前胃癌腹膜转移的确切机制尚未完全阐明,临床治疗效果较差。胃癌恶性腹水缺乏有效的研究模型,制约了相关研究的进展。肿瘤类器官是一种新型体外3D模型,能极大程度保留原肿瘤细胞的特征。目前,许多常见肿瘤来源的肿瘤类器官均已成功构建,并且有报道用于临床药敏试验。但目前尚未有培养恶性腹水来源肿瘤类器官的报道。在这里我们用胃癌患者的恶性腹水构建肿瘤类器官模型,并通过病理组织学和基因组学等方法进行鉴定。针对腹水上清能促进肿瘤类器官生长的现象,我们从外泌体以及细胞信号转导通路变化等角度进行了初步研究,以期进一步深入探讨胃癌腹膜转移的分子生物学机制。研究方法:1、收集胃癌患者腹水用于类器官培养。肿瘤类器官培养的主要步骤:离心分离腹水上清和细胞沉淀,显微镜下细胞计数,每400个细胞团/1000-2000个单细胞用50μl Matrigel重悬,混匀后接种于预热24孔板。将24孔板置于37℃培养箱,待Mat...
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常胃类器官（左）胃癌类器官（右）
海军军医大学硕士学位论文-14-图2来源于胃癌腹水的肿瘤类器官。松散型（左），致密型（右）。为了增加类器官培养成功率与产量，我们尝试向培养基中添加腹水上清以模拟腹水肿瘤细胞在体内的微环境。结果表明，添加腹水上清后，类器官的生长可以得到明显加快，表现为类器官球体增大和数量增多（图3）。然而，过高的腹水上清比例（一般大于50%时）反而不利于肿瘤类器官生长。腹水上清促进类器官生长的最大效应浓度具有个体差异性，一般在10-50%之间，个别患者腹水上清对其类器官生长无影响或者在100%腹水上清下类器官生长最佳。利用该优化后的培养体系，我们成功建立了来自36例患者的47株胃癌腹水来源的肿瘤类器官（其中2例患者腹水进行3次取样培养，9例患者进行2次取样培养），成功率达到95%。
胃癌腹水来源的肿瘤类器官的培养及腹水促类器官生长机制的初步研究-15-图3胃癌腹水上清对MADOs的影响。A：添加不同比例腹水上清后，胃癌腹水来源的肿瘤类器官随时间的形态变化；B：添加不同比例腹水上清后（0%，10%，25%，50%），两例胃癌患者腹水来源的肿瘤类器官生长明显加快；C：4例患者MADOs在经不同浓度腹水上清处理后（0%，10%，25%，50%，100%），统计各组类器官生长面积。二、腹水类器官的组织病理学特征为了分析MADOs能否保留原代腹水肿瘤细胞的组织学特征，我们利用了H&E染色和免疫组织化学染色的病理学方法。MADOs细胞具有典型肿瘤细胞的形态特征：
【参考文献】：
期刊论文
[1]STAT-3 correlates with lymph node metastasis and cell survival in gastric cancer[J]. Jing-Yu Deng,Xiang-Yu Liu,Han Liang,Department of Gastric Oncology Division,Tianjin Medical University Cancer Hospital and City Key Laboratory of Tianjin Cancer Center,Tianjin 300060,China Dan Sun,Lung Cancer Institute,Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300060,China Yi Pan,Department of Pathology,Tianjin Medical University Cancer Hospital,Tianjin 300060,China. World Journal of Gastroenterology. 2010(42)
本文编号：3393437
【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常胃类器官（左）胃癌类器官（右）
海军军医大学硕士学位论文-14-图2来源于胃癌腹水的肿瘤类器官。松散型（左），致密型（右）。为了增加类器官培养成功率与产量，我们尝试向培养基中添加腹水上清以模拟腹水肿瘤细胞在体内的微环境。结果表明，添加腹水上清后，类器官的生长可以得到明显加快，表现为类器官球体增大和数量增多（图3）。然而，过高的腹水上清比例（一般大于50%时）反而不利于肿瘤类器官生长。腹水上清促进类器官生长的最大效应浓度具有个体差异性，一般在10-50%之间，个别患者腹水上清对其类器官生长无影响或者在100%腹水上清下类器官生长最佳。利用该优化后的培养体系，我们成功建立了来自36例患者的47株胃癌腹水来源的肿瘤类器官（其中2例患者腹水进行3次取样培养，9例患者进行2次取样培养），成功率达到95%。
胃癌腹水来源的肿瘤类器官的培养及腹水促类器官生长机制的初步研究-15-图3胃癌腹水上清对MADOs的影响。A：添加不同比例腹水上清后，胃癌腹水来源的肿瘤类器官随时间的形态变化；B：添加不同比例腹水上清后（0%，10%，25%，50%），两例胃癌患者腹水来源的肿瘤类器官生长明显加快；C：4例患者MADOs在经不同浓度腹水上清处理后（0%，10%，25%，50%，100%），统计各组类器官生长面积。二、腹水类器官的组织病理学特征为了分析MADOs能否保留原代腹水肿瘤细胞的组织学特征，我们利用了H&E染色和免疫组织化学染色的病理学方法。MADOs细胞具有典型肿瘤细胞的形态特征：
【参考文献】：
期刊论文
[1]STAT-3 correlates with lymph node metastasis and cell survival in gastric cancer[J]. Jing-Yu Deng,Xiang-Yu Liu,Han Liang,Department of Gastric Oncology Division,Tianjin Medical University Cancer Hospital and City Key Laboratory of Tianjin Cancer Center,Tianjin 300060,China Dan Sun,Lung Cancer Institute,Tianjin Medical University General Hospital,Tianjin 300060,China Yi Pan,Department of Pathology,Tianjin Medical University Cancer Hospital,Tianjin 300060,China. World Journal of Gastroenterology. 2010(42)
本文编号：3393437
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