EHF缺失诱导胰腺癌免疫微环境抑制的机制研究

发布时间：2021-09-11 20:53

　　背景EHF（ETS同源因子/上皮特异性ETS因子家族成员3,ESE3）是E26转化特异性（ETS）超家族的成员。本课题组前期研究发现EHF在胰腺癌中为一种抑癌基因,通过上调E钙粘素的表达抑制胰腺癌侵袭迁移能力。在预实验中发现肿瘤EHF表达缺失与肿瘤浸润调节性T细胞、骨髓来源的抑制细胞以及CD8+T细胞比例相关。目前关于EHF的研究主要集中于前列腺癌以及树突细胞分化过程。在前列腺癌中,EHF缺失能够促进前列腺癌干性表型的出现以及转移能力的增加;在树突细胞中,EHF高表达能够促进树突细胞成熟。然而目前尚无关于肿瘤EHF缺失与免疫微环境的相关研究。近年来,以抗PD1/PD-L1为代表的免疫检查点治疗为胰腺癌带来了新的希望;然而,因胰腺癌高度免疫抑制的微环境特点,在现有的临床试验中,大部分胰腺癌患者对单药抗PD1/PD-L1治疗反应不佳。因此,目前临床亟需寻找有效的能够整体评估胰腺癌免疫微环境状态的分子标记以指导免疫治疗方案的精准选择。因此,我们设计该课题以明确胰腺肿瘤细胞中EHF表达缺失在胰腺癌免疫微环境重塑中的作用,并进一步探究EHF是否能够成为指导胰腺癌免疫治疗方案选择的生物标记。方法1... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

(A)小鼠胰腺癌皮下成瘤模型的实验方案：用PANC02-vector或PANC02-EHF对免疫健全小鼠C57BL/6小鼠和免疫缺陷小鼠BALB/c进行皮下成瘤实验

发现与PANC02-vector组小鼠相比，PANC02-EHF组小鼠肿瘤浸润的Treg, MDSCs比例显著减少。(图2.1B-C)TAM在PANC02-EHF组小鼠的浸润比例也有所减低，但是没有达到统计学差异。进一步我们对CD8+T细胞的表型进行分群检测。首先是对凋亡的CD8+T细胞进行检测。处理样品的过程均在冰上进行并且加快操作，保证两组组织处理时

(2) 将由不同的胰腺癌细胞诱导及增殖出的 Treg 细胞通过磁珠分选方法进行富集，富集后补充 IL2 进行培养。在 Transwell 小室下室中铺 5×104个 Treg 细胞，上室放入 2.5×104个 CFSE 染料标记的 CD8+T 细胞。(3) 共培养 5 天后检测 CD8+T 细胞 CFSE 信号衰减。用 CD8+T 细胞的增殖活性来代表 Treg 细胞的功能。3.2 结果3.2.1 肿瘤 EHF 的表达对体外 Treg 细胞向肿瘤细胞趋化能力的影响为确定是否 EHF 的表达水平能够影响肿瘤细胞对 Treg 细胞的趋化。我们将分选的 Treg 细胞放入 transwell 小室的上室，下室放入肿瘤细胞，共培养 24 小时后计数趋化到下室的 Treg 细胞的数量, 阳性对照采用趋化因子 CCL5。计数采用流式检测计数的方法。不同 EHF 表达水平的细胞其 Treg 细胞向肿瘤细胞的趋化能力无显著差异。3.2.2 肿瘤 EHF 的表达对 na ve CD4+T 细胞向 Treg 细胞诱导的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]运用抗PD-L1抗体治疗晚期癌症患者的安全性与疗效评价[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  肿瘤药学. 2012(03)



本文编号：3393704