整倍体和非整倍体结肠癌细胞对哌立福新的耐药性差异及其机制初步研究
发布时间：2021-09-23 03:17
目的:非整倍体指细胞内染色体数目出现异常,有丝分裂过程中纺锤体检验点功能失调等都可导致非整倍体的产生。大多数肿瘤中都存在非整倍体现象。临床上非整倍体程度高的肿瘤预后较差。研究表明非整倍体肿瘤细胞对常规化疗药物如顺铂、奥沙利铂和羟基脲等具有耐药性。因此,探讨更多种类化疗药物对非整倍体肿瘤细胞的作用情况对临床肿瘤治疗具有重要的意义。哌立福新（Perifosine）是目前处于临床试验阶段的一种蛋白激酶B（Protein kinase B,PKB,通称AKT）抑制剂,其可以通过抑制AKT活性增加抑癌基因p53的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖。哌立福新对不同核型肿瘤细胞的作用差异以及相关机制目前尚缺乏研究。本文以结肠癌为研究对象,通过在整倍体结肠癌细胞的基础上构建非整倍体模型,研究整倍体和非整倍体结肠癌细胞对哌立福新的耐药性差异,并进一步对其机制进行初步探讨。方法:（1）通过pT3G-MAD2慢病毒表达质粒构建HCT116-MAD2细胞系,该细胞系经盐酸强力霉素（Doxycycline,Dox）处理可以激活tet-on系统使细胞短时表达MAD2 shRNA以敲低纺锤体检验点关键蛋白MAD2表达,进而...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞内荧光观察结果??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎ?Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌｓ??－
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耐药性??１．通过细胞计数和ＣＣＫ－８实验检测哌立福新处理后Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞的生长??情况??为分析整倍体Ｄｏｘ（－）和非整倍体Ｄ〇Ｘ（＋）细胞对哌立福新的耐药性差异，首??先检测不同浓度哌立福新处理细胞４８?ｈ后两组细胞的生长情况。脈立福新药物??梯度设置如下：Ｏ｜ｉｍ〇ｌ／Ｌ、５ｊａｍｏｌ／Ｌ、ｌＯｊａｍｏｌ／Ｌ、２０（ｉｍｏｌ／Ｌ?和?４０ｊｉｍｏｌ／Ｌ。细胞??计数实验表明，哌立福新处理４８?ｈ后非整倍体Ｄｏｘ（＋）细胞的细胞数目显著高于??Ｄｏｘ（－）细胞（图３．４），提示Ｄｏｘ（＋）细胞相较Ｄｏｘ（－）细胞对哌立福新具有耐药性。??Ｓ?ｌ．〇．?Ｄｏｘ（＋）??｜?０．８?＋?Ｄｏｘ（－）??３?〇．６．?＼?卜又??Ｉ?０－４－?＼?、??０．２．??Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?（｜ｉＭ）??图３．４不同浓度哌立福新处理细胞４８?ｈ后Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）组细胞计数结果??Ｆｉｇｕｒｅ?３．４?Ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ｏｆ?Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌ?ａｆｔｅｒ?４８?ｈ?ｏｆ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??使用不同浓度哌立福新处理Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞４８ｈ。随着哌立福新浓度的升高，两组细??胞数量呈剂量依赖性降低，而Ｄｏｘ（＋）组细胞数量明显多于Ｄｏｘ（－）组。＊＊Ｐ＜０．０１??Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?４８?ｈ．?Ｗｉｔｈ?ｔｈｅ??ｉｎｃｒｅａｓｅ?ｏｆ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ
本文编号：3404923
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞内荧光观察结果??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎ?Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌｓ??－
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耐药性??１．通过细胞计数和ＣＣＫ－８实验检测哌立福新处理后Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞的生长??情况??为分析整倍体Ｄｏｘ（－）和非整倍体Ｄ〇Ｘ（＋）细胞对哌立福新的耐药性差异，首??先检测不同浓度哌立福新处理细胞４８?ｈ后两组细胞的生长情况。脈立福新药物??梯度设置如下：Ｏ｜ｉｍ〇ｌ／Ｌ、５ｊａｍｏｌ／Ｌ、ｌＯｊａｍｏｌ／Ｌ、２０（ｉｍｏｌ／Ｌ?和?４０ｊｉｍｏｌ／Ｌ。细胞??计数实验表明，哌立福新处理４８?ｈ后非整倍体Ｄｏｘ（＋）细胞的细胞数目显著高于??Ｄｏｘ（－）细胞（图３．４），提示Ｄｏｘ（＋）细胞相较Ｄｏｘ（－）细胞对哌立福新具有耐药性。??Ｓ?ｌ．〇．?Ｄｏｘ（＋）??｜?０．８?＋?Ｄｏｘ（－）??３?〇．６．?＼?卜又??Ｉ?０－４－?＼?、??０．２．??Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?（｜ｉＭ）??图３．４不同浓度哌立福新处理细胞４８?ｈ后Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）组细胞计数结果??Ｆｉｇｕｒｅ?３．４?Ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒｓ?ｏｆ?Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌ?ａｆｔｅｒ?４８?ｈ?ｏｆ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??使用不同浓度哌立福新处理Ｄｏｘ（－）和Ｄｏｘ（＋）细胞４８ｈ。随着哌立福新浓度的升高，两组细??胞数量呈剂量依赖性降低，而Ｄｏｘ（＋）组细胞数量明显多于Ｄｏｘ（－）组。＊＊Ｐ＜０．０１??Ｄｏｘ（－）?ａｎｄ?Ｄｏｘ（＋）?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?４８?ｈ．?Ｗｉｔｈ?ｔｈｅ??ｉｎｃｒｅａｓｅ?ｏｆ?ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔ
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