蛋白酪氨酸磷酸酶受体B在结直肠癌转移中的作用及机制研究
发布时间：2021-10-10 07:30
第一部分蛋白酪氨酸磷酸酶受体B在结肠癌转移中的作用及机制研究研究目的:结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中居第2位,肿瘤转移是影响结直肠癌患者远期生存的重要因素。蛋白质酪氨酸磷酸酶受体B（PTPRB）是蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一员,有研究证实PTPRB功能失调与多种肿瘤的发生及发展有关,然而它在结直肠癌转移中的作用尚不清楚,在本研究中,我们将探索PTPRB在结直肠癌转移中发挥的作用,并明确其内在的分子机制。材料及方法:选取3种人结直肠癌细胞系（LOVO、HCT116、HT29）,实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western-blot）检测各细胞系中PTPRB基因及蛋白的表达水平,细胞划痕实验和细胞侵袭转移实验（Transwell）检测各细胞系侵袭转移能力。小干扰RNA（siRNA）或过表达质粒分别敲除或上调结肠癌细胞中PTPRB的表达,观察敲除或过表达PTPRB后各结肠癌细胞侵袭转移能力的变化。免疫荧光实验观察结肠癌细胞表型,RT-PCR和Western-blot检测上皮间质化（EMT）相关蛋白的表达情况,探索PTPRB与结直肠...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PTPRBmRNA在LOVO，HT29和HCT116中的表达情况（A）；PTPRB蛋白在LOVO，HT29和HCT116中的表达水平（B）
浙江大学博士学位论文正文第一部分结果32能力最弱（图2A）。Transwell实验检测结直肠癌细胞的侵袭能力，其结果同细胞划痕实验结果一致，LOVO的侵袭能力最强，HCT116次之，HT29的侵袭能力最弱（图2B）。将1.3.1.2与1.3.1.1的实验结果对比分析我们发现结直肠癌侵袭及转移能力与细胞中PTPRB表达水平呈正相关。（图2）细胞划痕实验检测LOVO，HT29和HCT116的转移能力（图A）；Transwell侵袭实验检测LOVO，HT29和HCT116的侵袭能力（图B）。（**P<0.01;***P<0.001）1.3.2PTPRB对结直肠癌细胞的侵袭转移能力的影响1.3.2.1PTPRBsiRNA和过表达质粒转染效率的检测为明确PTPRB对结直肠癌侵袭转移能力的影响，分别用PTPRB的siRNA和过表达质粒下调和上调LOVO、HT29和HCT116细胞中PTPRB的表达。利用
浙江大学博士学位论文正文第一部分结果33Western-blot检测PTPRBsiRNA和过表达质粒的转染效果，结果证实siRNA可以抑制LOVO、HT29和HCT116中PTPRB的表达（图3A），而转染PTPRB过表达质粒后，三种细胞系中的PTPRB的表达水平都明显上调（图3B）。（图3）PTPRBsiRNA转染效率检测（图3A），PTPRB过表达质粒转染效率检测（图3B）。（*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001）1.3.2.2PTPRB与结直肠癌转移能力的关系将上述敲除和过表达PTPRB的细胞接种于六孔板中，细胞划痕实验检测各组细胞的转移能力，实验证实PTPRB敲除组36h肿瘤细胞的划痕宽度明显宽于对照组，划痕愈合速度减慢，细胞转移能力减弱。相反，过表达PTPRB的结直肠癌细胞转移能力增强（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]Current treatment for colorectal liver metastases[J]. Evangelos P Misiakos,Nikolaos P Karidis,Gregory Kouraklis. World Journal of Gastroenterology. 2011(36)
[3]阻断趋化因子受体3途径对结肠癌患者术后局部复发和肝转移影响的研究[J]. 丁印鲁,张建良,唐思锋,傅勤烨,周勇,李占元,李兆亭. 中华普通外科杂志. 2008 (01)
本文编号：3427931
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PTPRBmRNA在LOVO，HT29和HCT116中的表达情况（A）；PTPRB蛋白在LOVO，HT29和HCT116中的表达水平（B）
浙江大学博士学位论文正文第一部分结果32能力最弱（图2A）。Transwell实验检测结直肠癌细胞的侵袭能力，其结果同细胞划痕实验结果一致，LOVO的侵袭能力最强，HCT116次之，HT29的侵袭能力最弱（图2B）。将1.3.1.2与1.3.1.1的实验结果对比分析我们发现结直肠癌侵袭及转移能力与细胞中PTPRB表达水平呈正相关。（图2）细胞划痕实验检测LOVO，HT29和HCT116的转移能力（图A）；Transwell侵袭实验检测LOVO，HT29和HCT116的侵袭能力（图B）。（**P<0.01;***P<0.001）1.3.2PTPRB对结直肠癌细胞的侵袭转移能力的影响1.3.2.1PTPRBsiRNA和过表达质粒转染效率的检测为明确PTPRB对结直肠癌侵袭转移能力的影响，分别用PTPRB的siRNA和过表达质粒下调和上调LOVO、HT29和HCT116细胞中PTPRB的表达。利用
浙江大学博士学位论文正文第一部分结果33Western-blot检测PTPRBsiRNA和过表达质粒的转染效果，结果证实siRNA可以抑制LOVO、HT29和HCT116中PTPRB的表达（图3A），而转染PTPRB过表达质粒后，三种细胞系中的PTPRB的表达水平都明显上调（图3B）。（图3）PTPRBsiRNA转染效率检测（图3A），PTPRB过表达质粒转染效率检测（图3B）。（*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001）1.3.2.2PTPRB与结直肠癌转移能力的关系将上述敲除和过表达PTPRB的细胞接种于六孔板中，细胞划痕实验检测各组细胞的转移能力，实验证实PTPRB敲除组36h肿瘤细胞的划痕宽度明显宽于对照组，划痕愈合速度减慢，细胞转移能力减弱。相反，过表达PTPRB的结直肠癌细胞转移能力增强（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]Current treatment for colorectal liver metastases[J]. Evangelos P Misiakos,Nikolaos P Karidis,Gregory Kouraklis. World Journal of Gastroenterology. 2011(36)
[3]阻断趋化因子受体3途径对结肠癌患者术后局部复发和肝转移影响的研究[J]. 丁印鲁,张建良,唐思锋,傅勤烨,周勇,李占元,李兆亭. 中华普通外科杂志. 2008 (01)
本文编号：3427931
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