LncRNA DANCR在舌鳞癌侵袭转移中的机制研究

发布时间：2021-10-11 15:05

　　目的:头颈鳞状细胞癌的发病率为癌症中的第六名,且在发展中国家趋于逐年攀升。舌鳞状细胞癌（TSCC）是最常见的头颈鳞状细胞癌,其特点是增殖率高,淋巴结转移率高,发病率逐年递增,且发病人群朝向年轻化和女性化发展。回顾过去,尽管手术、放疗和化疗等治疗手段的发展日新月异,但舌鳞癌晚期患者的预后仍不尽如人意,主要的致命原因为局部复发以及远处转移。近年来分子靶向治疗成为肿瘤综合治疗的研究热点,为肿瘤的治疗提供了新途径。因此,寻找高效特异、毒副作用小的治疗靶点具有积极的临床意义。长链非编码RNA（LncRNA）DANCR因维持表皮细胞干性被首次报道。研究发现,LncRNA DANCR能够促进前列腺癌、胃癌、结肠癌等恶性肿瘤的侵袭和转移;然而,其生物学作用及其在TSCC进展中的潜在机制尚未得到明确的阐述。本研究采用体内、外实验来探寻DANCR对TSCC的作用及其分子机制,为揭示肿瘤的恶性生物学特性以及舌鳞癌的治疗提供新见解、新方向。方法:1.在四种TSCC细胞系中（SCC9、TSCCA、TCa-8113、CAL-27）沉默或过表达DANCR后,通过MTT、划痕及Transwell实验,来观察DANCR... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :DANCR在 TSCC中的表达及生物学功能
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验试剂
            2.1.2 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 TSCC细胞复苏、培养、计数、传代和冻存
            2.2.2 qRT-PCR检测TSCC细胞中LncRNA DANCR的相对表达量
            2.2.3 si-DANCR的构建
            2.2.4 过表达DANCR质粒的构建
            2.2.5 细胞转染
            2.2.6 MTT实验
            2.2.7 细胞划痕实验
            2.2.8 Transwell实验
            2.2.9 DANCR靶基因的生物信息学预测
            2.2.10 qRT-PCR检测转染si-DANCR后 miR-135a-5p的表达变化
        2.3 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 四种TSCC细胞中LncRNA DANCR的相对表达量以及si-DANCR转染效率的测定
        3.2 TSCC细胞中沉默或过表达DANCR的 MTT实验
        3.3 TSCC细胞中沉默或过表达DANCR的划痕实验
        3.4 TSCC细胞中沉默或过表达DANCR的 Transwell实验
        3.5 qRT-PCR检测TSCC细胞中抑制或过表达DANCR后 miR-135a-5p的表达变化
    4 讨论
第二部分 :DANCR/miR-135a-5p通路促TSCC进展的机制研究
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验试剂
            2.1.2 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 荧光素酶报告
            2.2.2 qRT-PCR检测TSCC细胞中miR-135a-5p的相对表达量
            2.2.3 miR-135a-5p过表达细胞模型的建立
            2.2.4 TSCC细胞过表达miR-135a-5p的 MTT实验、划痕实验及Transwell实验
            2.2.5 qRT-PCR检测过表达miR-135a-5p后 KLF8 的表达变化
            2.2.6 Western blot检测过表达miR-135a-5p后 KLF8 的表达变化
            2.2.7 qRT-PCR检测沉默DANCR的 TSCC细胞中KLF8 的表达变化
        2.3 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 双荧光素酶报告
        3.2 qRT-PCR检测TSCC细胞中miR-135a-5p的相对表达量
        3.3 过表达miR-135a-5p细胞模型的建立
        3.4 TSCC细胞中过表达miR-135a-5p的 MTT实验、划痕实验及Transwell实验
        3.5 qRT-PCR和 Western blot检测过表达miR-135a-5p后 KLF8 的表达变化
        3.6 qRT-PCR检测沉默DANCR的 TSCC细胞中KLF8 的表达变化
    4 讨论
第三部分 :DANCR/mir-135a-5p/KLF8 轴促TSCC进展的机制及体内实验
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验试剂
            2.1.2 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 siRNA-KLF8 的构建
            2.2.2 miR-135a-5p抑制剂逆转si-DANCR功能作用的rescue实验
            2.2.3 沉默KLF8 逆转miR-135a-5p抑制剂功能作用的rescue实验
            2.2.4 靶向DANCR sh RNA的构建
            2.2.5 稳转细胞株的筛选和培养
            2.2.6 裸鼠成瘤实验
            2.2.7 Western blot测定瘤体组织中KLF8、MMP-2、MMP-9 的蛋白表达
            2.2.8 免疫组化实验
        2.3 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 miR-135a-5p抑制剂逆转si-DANCR功能作用的rescue实验
        3.2 沉默KLF8 逆转miR-135a-5p抑制剂功能作用的rescue实验
        3.3 LncRNA DANCR对体内成瘤的影响及组织中KLF8 蛋白的表达
    4 讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Long non-coding RNA highly up-regulated in liver cancer promotes exosome secretion[J]. Shun-Qi Cao,Hong Zheng,Bao-Cun Sun,Zheng-Lu Wang,Tao Liu,Dong-Hui Guo,Zhong-Yang Shen.  World Journal of Gastroenterology. 2019(35)
[2]Role of human papillomavirus in oropharyngeal squamous cell carcinoma: A review[J]. Robbie SR Woods,Esther M O’Regan,Susan Kennedy,Cara Martin,John J O’Leary,Conrad Timon.  World Journal of Clinical Cases. 2014(06)
[3]Non-coding RNAs and gastric cancer[J]. Pei-Fei Li,Sheng-Can Chen,Tian Xia,Xiao-Ming Jiang,Yong-Fu Shao,Bing-Xiu Xiao,Jun-Ming Guo.  World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[4]Non-coding RNAs in hepatitis C-induced hepatocellular carcinoma:Dysregulation and implications for early detection,diagnosis and therapy[J]. Weihong Hou,Herbert L Bonkovsky.  World Journal of Gastroenterology. 2013(44)

博士论文
[1]长链非编码RNA PlncRNA-1作为内源性竞争RNA调控雄激素受体表达促进前列腺癌进展的作用及机制研究[D]. 方梓宇.第二军医大学 2016



本文编号：3430748