FOXO3a/Parkin通过靶向ABCE1调控胃癌细胞增殖迁移和凋亡的机制研究

发布时间：2021-10-13 08:09

　　目的胃癌是在胃黏膜上皮发现的恶性肿瘤,其病死率居世界第二位。近年来对胃癌的研究有了重要进展,但是对于其早期诊断及发病机制仍未完全了解。Parkin是一种E3泛素连接酶,已经显示在多种癌症中起着抑癌基因的作用,包括胃癌。然而,Parkin在癌症中的作用机制尚不清楚。本研究,我们将进一步探讨Parkin在胃癌组织中的表达情况、Parkin在胃癌细胞增殖、迁移、凋亡中的作用及其作用机制。通过本项目的研究期望为胃癌的诊断、治疗提出新的靶点。方法分别通过实时定量PCR和蛋白质免疫印迹检测Parkin在胃癌组织样本和不同胃癌细胞系中的表达水平;通过流式细胞术检测细胞凋亡;MTT比色法检测细胞活性;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移;构建Parkin基因启动子荧光素酶报告基因载体,检测荧光素酶活性实验验证FOXO3a和Parkin基因启动子的结合;通过免疫共沉淀实验验证Parkin与ATP结合盒转运蛋白E1（ATP binding cassette transporter E1,ABCE1）的结合。结果在本研究中,我们发现Parkin在患者胃癌组织及胃癌细胞系中均表达下调,当Parki... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1.实验仪器与设备
    2.实验耗材与试剂
    3.临床组织样本
    4.细胞培养
    5.siRNA合成
    6.腺病毒构建
    7.质粒的构建与提取
    8.转染
    9.组织RNA提取
    10.实时定量PCR
    11.蛋白免疫印迹实验
    12.细胞划痕实验
    13.检测细胞活性:MTT(四甲基偶氮唑盐)实验
    14.检测细胞迁移:Transwell实验
    15.细胞凋亡实验
    16.免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP):蛋白质相互作用
    17.染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, CHIP)
    18.荧光素酶报告基因实验
    19.统计学方法
结果
    1.Parkin在胃癌组织和胃癌细胞系中低表达
    2.Parkin抑制胃癌细胞的增殖,迁移和侵袭
    3.Parkin通过促进DOX诱导的细胞凋亡来增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性
    4.Parkin直接靶向ABCE1
    5.ABCE1促进胃癌细胞的增殖和迁移,抑制胃癌细胞凋亡
    6.FOXO3a转录调节Parkin基因的表达
    7.FOXO3a抑制胃癌细胞增殖和迁移,促进凋亡,并增强胃癌对化疗药物的敏感性
    8.Parkin通过FOXO3a和 ABCE1 抑制胃癌的发展
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in gastric cancer early diagnosis[J]. Laura Necula,Lilia Matei,Denisa Dragu,Ana I Neagu,Cristina Mambet,Saviana Nedeianu,Coralia Bleotu,Carmen C Diaconu,Mihaela Chivu-Economescu.  World Journal of Gastroenterology. 2019(17)
[2]超级增强子在肿瘤研究中的进展[J]. 吴志强,米泽云.  遗传. 2019(01)
[3]miR-34a mediates oxaliplatin resistance of colorectal cancer cells by inhibiting macroautophagy via transforming growth factor-β/Smad4 pathway[J]. Chen Sun,Fu-Jing Wang,Hao-Gang Zhang,Xun-Zheng Xu,Rui-Chun Jia,Lei Yao,Peng-Fei Qiao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(10)
[4]ABCE1基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖和迁移能力的影响[J]. 李强,王九江,罗水发,朱俊杰.  中国病理生理杂志. 2015(05)



本文编号：3434280