OCCLUDIN对非小细胞肺癌SPC-A1细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响及其作用机制研究
发布时间：2021-10-16 11:51
研究背景和目的:紧密连接蛋白是存在于上皮细胞与内皮细胞之间的一种蛋白质,其作用是保持细胞间结构的完整性。OCCLUDIN蛋白作为紧密连接蛋白中主要一种类型,它的结构或表达发生变化会导致紧密连接结构及功能的改变,最终引起一些临床疾病的发生。研究发现,OCCLUDIN在多种肿瘤组织中表达异常,且OCCLUDIN与肿瘤细胞增殖、凋亡和侵袭迁移等有密切关系。而目前关于OCCLUDIN对非小细胞性肺癌发生发展影响及其作用机制尚不清楚。因此,本研究主要通过荧光定量PCR、Western blot、CCK-8法、流式细胞术、transwell实验、肿瘤细胞原位种植转移模型建立等方法,在体内外探讨OCCLUDIN对非小细胞性肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响。研究方法:收集非小细胞肺癌癌组织和癌旁正常组织标本,采用荧光定量PCR和Western blot技术分别检测组织中OCCLUDIN mRNA和蛋白表达水平。OCCLUDIN siRNA转染非小细胞肺癌细胞SPC-A1 48h后,采用CCK-8法检测OCCLUDIN对SPC-A1细胞增殖影响,并通过建立肿瘤细胞原位种植转移模型在体内验证OCCLUD...
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在非小细胞肺癌细胞株中表达情况??
转染４８ｈ后，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法进行蛋白表达检测。与ｃｏｎｔｒｏ丨组和??ｓｉＣｔｒｌ组相比，５０?ｎＭ?ｓｉＯＣＬＮ组的ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表达水平显著降低??（Ｐ＜０．００１）（图３－Ａ，?Ｂ）。上述结果表明，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?ｓｉＲＮＡ转染效率较高，??后续研究将选择５０?ｎＭ?ｓｉＲＮＡ浓度进行转染实验。??Ａ?Ｂ?°－８＇??ＯＣＬＮ?—？一》－?１１?０－４－?Ｗｍ??ＧＡＰＤＨ?ｍａｍ?ｒｎｍｍ?ｍｔｍ?１?—??０－２－?…??ＳＰＣ－Ａ１?ａ?＞?；—??ｔ?＿??／?＃?／??图３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ｓｉＲＮＡ转染后ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表达情况??Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表达情况；Ｂ：?ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表??达量的统计情况，＊＊＊Ｐ＜０．００１，ｓｉＯＣＬＮ组与ｃｏｎｔｒｏ丨和ｓｉＣｔｒｌ组比较??３．３?ＯＣＣＬＵＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响??为探宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ是否会影响ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖，本部分我们采用细胞和??动物实验分别研宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响，同时我们也通过检??测细胞周期来探讨调控细胞增殖的机制。??３．３．１?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在体外对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响??为观察ＯＣＣＵＪＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖能力的作用，本研宄通过ＣＣＫ８实??验检测ｃｏｎｔｒｏｌ组、ｓｉＣｔｒｌ组和ｓｉＯＣＬＮ组的细胞增殖能力。ＣＣＫ８实验结果显??示
验检测ｃｏｎｔｒｏｌ组、ｓｉＣｔｒｌ组和ｓｉＯＣＬＮ组的细胞增殖能力。ＣＣＫ８实验结果显??示，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?被沉默后，ｓｉＯＣＬＮ?组细胞在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ?和?１２０ｈ?的??吸光度较ｃｏｎｔｒｏ丨组和ｓｉＣｔｒｌ组均明显降低（图４），反映细胞增殖能力减弱。以??上结果表明，沉默ＯＣＣＬＵＤＩＮ可以显著抑制ＳＰＣ－ＡＩ细胞增殖能力。??２７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Benefit of everolimus as a monotherapy for a refractory breast cancer patient bearing multiple genetic mutations in the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway[J]. Yehui Shi,Wenwen Zhang,Yingnan Ye,Yanan Cheng,Lei Han,Pengpeng Liu,Weipeng Zhao,Zhongsheng Tong,Jinpu Yu. Cancer Biology & Medicine. 2018(03)
[2]子宫内膜样腺癌组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达及关联性[J]. 梁晓红,段广庭,袁颖. 中国老年学杂志. 2018(04)
[3]肺癌发生危险因素的分析[J]. 王辛华,孙凯. 中西医结合心血管病电子杂志. 2018(05)
[4]中国癌症症状管理实践指南计划书[J]. 张方圆,沈傲梅,马婷婷,王盈,武佩佩,任海玲,焦杰,靳英辉. 护理研究. 2018(01)
[5]Snail1基因沉默对喉鳞癌Hep-2细胞紧密连接蛋白表达及迁移能力的影响[J]. 刘双凤,沈阳,冯唐,刘肖珩. 生物医学工程学杂志. 2017(04)
[6]紧密连接蛋白闭锁蛋白在大肠癌及大肠腺瘤组织的表达[J]. 马志杰,朱志坚,樊丽伟,张东姣,曹伟,刘艺,王爱民. 中华实验外科杂志. 2017 (02)
[7]食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义[J]. 朱克超,葛腾飞,于在诚,汪渊. 安徽医科大学学报. 2012(05)
[8]Occludin表达与胃癌发生发展的相关性[J]. 陈虹,张声,郑珂,王行富. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(10)
[9]紧密连接分子Occludin mRNA在胃癌中的表达和分布[J]. 尹芳,乔泰东,时永全,肖冰,陈宝军,苗继延,樊代明. 中华肿瘤杂志. 2002(06)
本文编号：3439761
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在非小细胞肺癌细胞株中表达情况??
转染４８ｈ后，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法进行蛋白表达检测。与ｃｏｎｔｒｏ丨组和??ｓｉＣｔｒｌ组相比，５０?ｎＭ?ｓｉＯＣＬＮ组的ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表达水平显著降低??（Ｐ＜０．００１）（图３－Ａ，?Ｂ）。上述结果表明，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?ｓｉＲＮＡ转染效率较高，??后续研究将选择５０?ｎＭ?ｓｉＲＮＡ浓度进行转染实验。??Ａ?Ｂ?°－８＇??ＯＣＬＮ?—？一》－?１１?０－４－?Ｗｍ??ＧＡＰＤＨ?ｍａｍ?ｒｎｍｍ?ｍｔｍ?１?—??０－２－?…??ＳＰＣ－Ａ１?ａ?＞?；—??ｔ?＿??／?＃?／??图３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ｓｉＲＮＡ转染后ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表达情况??Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表达情况；Ｂ：?ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表??达量的统计情况，＊＊＊Ｐ＜０．００１，ｓｉＯＣＬＮ组与ｃｏｎｔｒｏ丨和ｓｉＣｔｒｌ组比较??３．３?ＯＣＣＬＵＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响??为探宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ是否会影响ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖，本部分我们采用细胞和??动物实验分别研宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响，同时我们也通过检??测细胞周期来探讨调控细胞增殖的机制。??３．３．１?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在体外对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖的影响??为观察ＯＣＣＵＪＤＩＮ对ＳＰＣ－Ａ１细胞增殖能力的作用，本研宄通过ＣＣＫ８实??验检测ｃｏｎｔｒｏｌ组、ｓｉＣｔｒｌ组和ｓｉＯＣＬＮ组的细胞增殖能力。ＣＣＫ８实验结果显??示
验检测ｃｏｎｔｒｏｌ组、ｓｉＣｔｒｌ组和ｓｉＯＣＬＮ组的细胞增殖能力。ＣＣＫ８实验结果显??示，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?被沉默后，ｓｉＯＣＬＮ?组细胞在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ?和?１２０ｈ?的??吸光度较ｃｏｎｔｒｏ丨组和ｓｉＣｔｒｌ组均明显降低（图４），反映细胞增殖能力减弱。以??上结果表明，沉默ＯＣＣＬＵＤＩＮ可以显著抑制ＳＰＣ－ＡＩ细胞增殖能力。??２７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Benefit of everolimus as a monotherapy for a refractory breast cancer patient bearing multiple genetic mutations in the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway[J]. Yehui Shi,Wenwen Zhang,Yingnan Ye,Yanan Cheng,Lei Han,Pengpeng Liu,Weipeng Zhao,Zhongsheng Tong,Jinpu Yu. Cancer Biology & Medicine. 2018(03)
[2]子宫内膜样腺癌组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达及关联性[J]. 梁晓红,段广庭,袁颖. 中国老年学杂志. 2018(04)
[3]肺癌发生危险因素的分析[J]. 王辛华,孙凯. 中西医结合心血管病电子杂志. 2018(05)
[4]中国癌症症状管理实践指南计划书[J]. 张方圆,沈傲梅,马婷婷,王盈,武佩佩,任海玲,焦杰,靳英辉. 护理研究. 2018(01)
[5]Snail1基因沉默对喉鳞癌Hep-2细胞紧密连接蛋白表达及迁移能力的影响[J]. 刘双凤,沈阳,冯唐,刘肖珩. 生物医学工程学杂志. 2017(04)
[6]紧密连接蛋白闭锁蛋白在大肠癌及大肠腺瘤组织的表达[J]. 马志杰,朱志坚,樊丽伟,张东姣,曹伟,刘艺,王爱民. 中华实验外科杂志. 2017 (02)
[7]食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义[J]. 朱克超,葛腾飞,于在诚,汪渊. 安徽医科大学学报. 2012(05)
[8]Occludin表达与胃癌发生发展的相关性[J]. 陈虹,张声,郑珂,王行富. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(10)
[9]紧密连接分子Occludin mRNA在胃癌中的表达和分布[J]. 尹芳,乔泰东,时永全,肖冰,陈宝军,苗继延,樊代明. 中华肿瘤杂志. 2002(06)
本文编号：3439761
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