2型固有淋巴细胞通过介导CXCL2-中性粒细胞诱导肝癌微环境免疫抑制的机制研究
发布时间：2021-10-18 14:29
目的:由于其组织固有特性,2型固有淋巴细胞（ILC2）的功能随组织微环境不同而改变。大量研究已经阐明了ILC2在多种炎症过程中的作用,但是它们在肝癌中的作用仍然未知。在这里,我们鉴定了肝癌微环境诱导的一群非经典ILC2,并分析研究其对肝癌微环境的影响。材料与方法:我们从肝癌患者（n=150）中收集配对的肝癌和癌旁组织以及一些外周血和门静脉血样,从肝血管瘤肝切患者（n=20）中收集正常肝脏组织。通过流式细胞术,质谱流式,免疫荧光,免疫印迹,RNA转录组测序（来自分选的肝脏ILC2）检测病人肝脏组织中的ILC2,并分析其与患者生存预后的关系。将癌基因质粒与转座酶质粒一起通过小鼠尾静脉进行水动力高压注射（HDI）来建立小鼠原位肝癌模型。通过尾静脉给肿瘤负荷的小鼠注射分离的原代ILC2或PBS。为了研究ILC2的组织驻留或循环特性,给小鼠尾静脉内注射PE染料结合的抗CD45流式抗体来实现血管内染色。通过腹腔内给予溴脱氧尿苷（Brd U）,对肝脏内ILC2进行Brd U的测定来观察ILC2在体内的增殖情况。通过质粒构建、病毒感染对小鼠ILC2进行KLRG1和CXCL2基因的敲除或过表达后体外实验...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
肝癌及癌旁组织中ILC2的表型鉴定
图1.1肝癌及癌旁组织中ILC2的表型鉴定(A)用细胞表面标记鉴定人肝脏组织中ILC2以及流式分析的圈门方法;其中Lineage抗体包括CD3,CD19,CD20,CD11b,CD11c,CD235a,CD14,CD16,CD34,CD123 and CD94。(B)肿瘤与癌旁组织的取材示意图,癌旁组织的取材距离肿瘤边缘2cm以上;并用转录因子GATA3验证了肝癌及癌旁肝癌中鉴定的ILC2。(C)肝癌和癌旁质谱流式结果(上一级圈门为CD45+LIN-CD127+)展示了用于鉴定ILC2的一系列表面分子和转录因子。
因为ILC是一群高度异质性细胞,在不同的微环境中所发挥的功能不一样,其相应的表型也有所改变。从炎症到癌症,肝癌的微环境相比于癌旁表现出明显的不同。在检测到肝癌及癌旁ILC2后,我们进一步验证了肝癌及癌旁中ILC2的其他功能性细胞表面分子以及组织信号受体的表达情况,发现来自肝癌组织中的ILC2的表面分子KLRG1相比于癌旁的ILC2明显下调(图1.2A)。为了明确这一发现,我们检测了15对肝癌和癌旁标本以及8例肝癌病人外周血来源的ILC2中的KLRG1表达,发现肝癌组织中KLRG1-的ILC2的比例显著高于癌旁及外周血ILC2(图1.2B)。另外,鉴于IL-33、IL-25和TSLP是ILC2的主要激活因子,其相应的受体分别是ST2、IL17RB和TSLPR,而且有相关研究报道在其他疾病如肺部炎症、过敏性皮肤炎中的ILC2表达这些受体,我们对肝癌和癌旁组织中的ILC2进行了这些受体蛋白的检测,发现肝癌及癌旁中,只有少量的ILC2表达ST2和TSLPR,而两者几乎均不表达IL17RB(图1.2C)。同样地,我们统计了几例配对样本中ILC2的ST2(n=10)、IL17RB(n=11)和TSLPR(n=8)的表达情况。我们发现外周血中ILC2的ST2和TSLPR的平均表达量高于肝组织中的ILC2(图1.2D)。图1.2肝癌和癌旁组织中ILC2的异质性
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of innate immunity in the development of hepatocellular carcinoma[J]. Rajagopal N Aravalli. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[2]Liver tumor infiltrating lymphocytes: Comparison of hepatocellular and cholangiolar carcinoma[J]. Hans-Udo Kasper,Uta Drebber,Dirk Ludger Stippel,Hans Peter Dienes,Anton Gillessen. World Journal of Gastroenterology. 2009(40)
本文编号：3442964
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
肝癌及癌旁组织中ILC2的表型鉴定
图1.1肝癌及癌旁组织中ILC2的表型鉴定(A)用细胞表面标记鉴定人肝脏组织中ILC2以及流式分析的圈门方法;其中Lineage抗体包括CD3,CD19,CD20,CD11b,CD11c,CD235a,CD14,CD16,CD34,CD123 and CD94。(B)肿瘤与癌旁组织的取材示意图,癌旁组织的取材距离肿瘤边缘2cm以上;并用转录因子GATA3验证了肝癌及癌旁肝癌中鉴定的ILC2。(C)肝癌和癌旁质谱流式结果(上一级圈门为CD45+LIN-CD127+)展示了用于鉴定ILC2的一系列表面分子和转录因子。
因为ILC是一群高度异质性细胞,在不同的微环境中所发挥的功能不一样,其相应的表型也有所改变。从炎症到癌症,肝癌的微环境相比于癌旁表现出明显的不同。在检测到肝癌及癌旁ILC2后,我们进一步验证了肝癌及癌旁中ILC2的其他功能性细胞表面分子以及组织信号受体的表达情况,发现来自肝癌组织中的ILC2的表面分子KLRG1相比于癌旁的ILC2明显下调(图1.2A)。为了明确这一发现,我们检测了15对肝癌和癌旁标本以及8例肝癌病人外周血来源的ILC2中的KLRG1表达,发现肝癌组织中KLRG1-的ILC2的比例显著高于癌旁及外周血ILC2(图1.2B)。另外,鉴于IL-33、IL-25和TSLP是ILC2的主要激活因子,其相应的受体分别是ST2、IL17RB和TSLPR,而且有相关研究报道在其他疾病如肺部炎症、过敏性皮肤炎中的ILC2表达这些受体,我们对肝癌和癌旁组织中的ILC2进行了这些受体蛋白的检测,发现肝癌及癌旁中,只有少量的ILC2表达ST2和TSLPR,而两者几乎均不表达IL17RB(图1.2C)。同样地,我们统计了几例配对样本中ILC2的ST2(n=10)、IL17RB(n=11)和TSLPR(n=8)的表达情况。我们发现外周血中ILC2的ST2和TSLPR的平均表达量高于肝组织中的ILC2(图1.2D)。图1.2肝癌和癌旁组织中ILC2的异质性
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of innate immunity in the development of hepatocellular carcinoma[J]. Rajagopal N Aravalli. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[2]Liver tumor infiltrating lymphocytes: Comparison of hepatocellular and cholangiolar carcinoma[J]. Hans-Udo Kasper,Uta Drebber,Dirk Ludger Stippel,Hans Peter Dienes,Anton Gillessen. World Journal of Gastroenterology. 2009(40)
本文编号：3442964
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