超声激励微泡空化联合恩度抑制大鼠Walker-256肿瘤生长的实验研究
发布时间：2021-10-25 06:32
研究背景肿瘤新生血管生成对于肿瘤的发生,发展以及转移具有十分重要的意义。多种抗肿瘤药物以肿瘤新生血管生成为治疗靶点,但是肿瘤细胞及微环境失去了正常调控,致使肿瘤新生血管多方面都表现出异常,管壁发育幼稚、内皮细胞连接不紧密、基底膜缺失以及周细胞疏松等血管壁功能不全,导致血管壁通透性高、孔隙增多、渗出增加、细胞间质液压增加,进一步加剧细胞微环境的缺氧和酸性环境,影响肿瘤细胞对药物摄取,对治疗十分不利。一些肿瘤药物以抗肿瘤血管生成为治疗靶点,但由于上述原因,抗肿瘤药物单独使用疗效有限,且全身毒副作用明显,因此各种联合治疗已逐渐成为新的趋势。课题组前期研究发现,脉冲式高声压（>4MPa）治疗超声激励微泡空化能够利用机械作用损毁肿瘤微血管,并且明显阻断肿瘤内部血流灌注,这可能成为一种物理性的抗血管治疗方法,但该方法带来的血流阻断效应是可逆性的,一般在治疗24小时后肿瘤血流即会逐渐恢复。已有研究表明,超声诱导微泡空化时,可形成声孔增加肿瘤细胞通透性,降低组织间隙液压,正常化肿瘤微血管,使化疗药物的递送和释放更为有效。同时,超声激励的微泡空化和以血管内皮为靶点的化疗药物均会对肿瘤微血管产生毁损...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠Walker-256肿瘤二维超声、CEUS及定量分析图A.二维超声图像;B.肿瘤超声造影图，白线内区为勾画的感兴趣区（ROI）;C.ROI时间-强度曲线
陆军军医大学硕士学位论文17（7）组织化学检查末次二维超声及超声造影结束后，以过量戊巴比妥钠处死实验动物后，沿肿瘤包膜与正常组织的边界，完整剥离肿瘤组织，经尾静脉注射过量戊巴比妥钠处死实验动物。剥离的肿瘤用生理盐水漂洗后，固定于4%多聚甲醛中，脱水后，石蜡包埋，制作为5μm的切片。随后进行VEGFA、CD31、CD34免疫组织化学染色，在光学显微镜100×视野下筛选阳性染色最密集区，即“热区”，随后在该区域400×镜下随机计数3个视野内的微血管数，取其平均值即为肿瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）（图2）。图2大鼠Walker-256肿瘤治疗后MVD计数示意图（VEGFA染色）A.微泡超声恩度组肿瘤微血管，100×视野，圆形为所寻热点”区域；B.微泡超声恩度组肿瘤微血管，400×视野；C.假照组肿瘤，400×视野。（8）凋亡率检测利用TUNEL法检测试剂盒对各组石蜡切片进行检测。对治疗后的肿瘤细胞进行凋亡分析。显微镜下观察细胞凋亡情况，每张切片选取5个400×视野，每个视野下计数200个细胞，在1000个细胞中，细胞核呈褐色深染的阳性细胞个数，记为凋亡指数（apoptosisindex,AI）。（9）透射电镜观察取部分肿瘤标本，切成1mm3左右的小块，用4%戊二醛固定。处理后的标本用透射电镜（transmissionelectronmicroscopy,TEM)进行观察和拍照。（8）统计学分析采用SPSS25.0统计分析软件。各组PI，AUC，肿瘤体积，MVD及AI数据为计量资料且符合正态分布，以±表示，并采用单因素方差分析进行比较，进一步组间比较采用LSD法。以p＜0.05为差异有统计学意义。
陆军军医大学硕士学位论文19表2.各组Walker-256肿瘤在不同时间点的曲线下面积(AUC)比较组别(n=15)曲线下面积治疗前治疗后1天治疗后4天Endostar+MEUS7206.09±309.945526.29±445.964485.49±466.03Endostar7132.50±340.386244.41±485.675103.24±452.65MEUS7114.25±190.856197.28±445.365890.84±326.89ShamUS7124.18±199.706783.76±215.215901.06±424.49F值1.34832.16339.608p值0.718＜0.001＜0.001图3各组Walker-256肿瘤治疗前、治疗后1天、治疗后4天造影图。白箭头为肿瘤区域，Tx：treatment。图4各组Walker-256肿瘤在不同时间点的PI与AUC柱状图。*与恩度组、微泡超声组、假照组比较均有显著差异，p＜0.05。#与假照组比较有显著差异，p＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]超声介导肿瘤免疫治疗的研究进展[J]. 林晓红,李攀. 临床超声医学杂志. 2020(02)
[2]抗肿瘤血管生成治疗的研究进展及应对策略[J]. 李娜,邢书娟,黄国友,冷欢,李鹏,王琳. 生命科学研究. 2020(01)
[3]肿瘤靶向治疗中低频超声联合微泡造影剂的研究新进展（英文）[J]. Li-ying WANG,Shu-sen ZHENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2019(04)
[4]Clinical study of ultrasound and microbubbles for enhancing chemotherapeutic sensitivity of malignant tumors in digestive system[J]. Yanjie Wang,Yan Li,Kun Yan,Lin Shen,Wei Yang,Jifang Gong,Ke Ding. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(05)
[5]超声介导的肿瘤免疫治疗[J]. 张晓婷,戴志飞. 科学通报. 2017(35)
[6]Endocan-expressing microvessel density as a prognostic factor for survival in human gastric cancer[J]. Yuan Chang,Wei Niu,Pei-long lian,xian-qiang Wang,Zhi-xin Meng,Yi liu,Rui Zhao. World Journal of Gastroenterology. 2016(23)
[7]缺氧微环境在肿瘤进展中的作用[J]. 秦承东,任正刚,汤钊猷. 肿瘤. 2016(01)
[8]运用抗PD-L1抗体治疗晚期癌症患者的安全性与疗效评价[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow. 肿瘤药学. 2012(03)
[9]低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用[J]. 朱梅,李佩倞,钟渝,梁红敏,何利平,刘政. 中国医学影像技术. 2012(04)
[10]微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的初步研究[J]. 高顺记,李佩倞,赵洋,刘政,刘佳,张婵,谭开彬,高云华. 中国超声医学杂志. 2010 (02)
硕士论文
[1]超声联合微泡增强宫颈癌对化疗药物敏感性的实验及临床研究[D]. 朱燕.安徽医科大学 2016
本文编号：3456842
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠Walker-256肿瘤二维超声、CEUS及定量分析图A.二维超声图像;B.肿瘤超声造影图，白线内区为勾画的感兴趣区（ROI）;C.ROI时间-强度曲线
陆军军医大学硕士学位论文17（7）组织化学检查末次二维超声及超声造影结束后，以过量戊巴比妥钠处死实验动物后，沿肿瘤包膜与正常组织的边界，完整剥离肿瘤组织，经尾静脉注射过量戊巴比妥钠处死实验动物。剥离的肿瘤用生理盐水漂洗后，固定于4%多聚甲醛中，脱水后，石蜡包埋，制作为5μm的切片。随后进行VEGFA、CD31、CD34免疫组织化学染色，在光学显微镜100×视野下筛选阳性染色最密集区，即“热区”，随后在该区域400×镜下随机计数3个视野内的微血管数，取其平均值即为肿瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）（图2）。图2大鼠Walker-256肿瘤治疗后MVD计数示意图（VEGFA染色）A.微泡超声恩度组肿瘤微血管，100×视野，圆形为所寻热点”区域；B.微泡超声恩度组肿瘤微血管，400×视野；C.假照组肿瘤，400×视野。（8）凋亡率检测利用TUNEL法检测试剂盒对各组石蜡切片进行检测。对治疗后的肿瘤细胞进行凋亡分析。显微镜下观察细胞凋亡情况，每张切片选取5个400×视野，每个视野下计数200个细胞，在1000个细胞中，细胞核呈褐色深染的阳性细胞个数，记为凋亡指数（apoptosisindex,AI）。（9）透射电镜观察取部分肿瘤标本，切成1mm3左右的小块，用4%戊二醛固定。处理后的标本用透射电镜（transmissionelectronmicroscopy,TEM)进行观察和拍照。（8）统计学分析采用SPSS25.0统计分析软件。各组PI，AUC，肿瘤体积，MVD及AI数据为计量资料且符合正态分布，以±表示，并采用单因素方差分析进行比较，进一步组间比较采用LSD法。以p＜0.05为差异有统计学意义。
陆军军医大学硕士学位论文19表2.各组Walker-256肿瘤在不同时间点的曲线下面积(AUC)比较组别(n=15)曲线下面积治疗前治疗后1天治疗后4天Endostar+MEUS7206.09±309.945526.29±445.964485.49±466.03Endostar7132.50±340.386244.41±485.675103.24±452.65MEUS7114.25±190.856197.28±445.365890.84±326.89ShamUS7124.18±199.706783.76±215.215901.06±424.49F值1.34832.16339.608p值0.718＜0.001＜0.001图3各组Walker-256肿瘤治疗前、治疗后1天、治疗后4天造影图。白箭头为肿瘤区域，Tx：treatment。图4各组Walker-256肿瘤在不同时间点的PI与AUC柱状图。*与恩度组、微泡超声组、假照组比较均有显著差异，p＜0.05。#与假照组比较有显著差异，p＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]超声介导肿瘤免疫治疗的研究进展[J]. 林晓红,李攀. 临床超声医学杂志. 2020(02)
[2]抗肿瘤血管生成治疗的研究进展及应对策略[J]. 李娜,邢书娟,黄国友,冷欢,李鹏,王琳. 生命科学研究. 2020(01)
[3]肿瘤靶向治疗中低频超声联合微泡造影剂的研究新进展（英文）[J]. Li-ying WANG,Shu-sen ZHENG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2019(04)
[4]Clinical study of ultrasound and microbubbles for enhancing chemotherapeutic sensitivity of malignant tumors in digestive system[J]. Yanjie Wang,Yan Li,Kun Yan,Lin Shen,Wei Yang,Jifang Gong,Ke Ding. Chinese Journal of Cancer Research. 2018(05)
[5]超声介导的肿瘤免疫治疗[J]. 张晓婷,戴志飞. 科学通报. 2017(35)
[6]Endocan-expressing microvessel density as a prognostic factor for survival in human gastric cancer[J]. Yuan Chang,Wei Niu,Pei-long lian,xian-qiang Wang,Zhi-xin Meng,Yi liu,Rui Zhao. World Journal of Gastroenterology. 2016(23)
[7]缺氧微环境在肿瘤进展中的作用[J]. 秦承东,任正刚,汤钊猷. 肿瘤. 2016(01)
[8]运用抗PD-L1抗体治疗晚期癌症患者的安全性与疗效评价[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow. 肿瘤药学. 2012(03)
[9]低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用[J]. 朱梅,李佩倞,钟渝,梁红敏,何利平,刘政. 中国医学影像技术. 2012(04)
[10]微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的初步研究[J]. 高顺记,李佩倞,赵洋,刘政,刘佳,张婵,谭开彬,高云华. 中国超声医学杂志. 2010 (02)
硕士论文
[1]超声联合微泡增强宫颈癌对化疗药物敏感性的实验及临床研究[D]. 朱燕.安徽医科大学 2016
本文编号：3456842
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