DAB2IP低表达促进食管鳞状细胞癌放疗抵抗的作用与机制研究

发布时间：2021-10-26 04:11

　　研究背景DAB2IP（DOC-2/DAB2 interactive protein）基因是一个新发现的抑癌基因,与许多肿瘤都息息相关。近来许多研究人员发现,DAB2IP在多种肿瘤的发生发展的过程中出现表达下调或缺失,例如在前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌等。DAB2IP在这些肿瘤中研究的不断深入,但在食管癌中的表达和作用尚不清楚。研究目的探讨DAB2IP在食管癌中的表达水平和是否对食管癌的放疗敏感性发挥作用。研究方法通过Western Blot检测正常食管和食管癌中的DAB2IP表达情况。构建Kyse150稳转过表达细胞株Kyse150-DAB2IP和对照组Kyse150-vector,和EC109稳定敲除细胞株对照组EC109-shluc和敲除组EC109-sh DAB2IP。通过流式细胞术测凋亡检测EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP对辐射后凋亡的影响。对EC109-shluc和EC109-sh DAB2IP的细胞进行辐射处理,再进行免疫荧光共聚焦实验检测53BP1和γ-H2AX的表达,对比DAB2IP是否对放疗引起的损伤有影响。建立Kyse150裸鼠移植瘤模型,... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

用WB评估正常和肿瘤细胞中DAB2IP的蛋白表达水平

安徽医科大学硕士学位论文21图1.用WB评估正常和肿瘤细胞中DAB2IP的蛋白表达水平。N1、N2为正常食管细胞，TE1、EC109、Kyse150、Kyse30分别为食管癌细胞株。Fig1.TheexpressionofDAB2IPassessedbyWesternBoltinnormalandtumorcells.N1andN2arenormalesophagealcells,andTE1,EC109,Kyse150,andKyse30areesophagealcancercelllines.图2.左边为Kyse150稳转细胞株对照组和过表达组的蛋白表达水平，右边为EC109细胞株敲除对照组和DAB2IP的正常表达组的蛋白表达情况。Fig2.TheleftsideshowstheproteinexpressionoftheKyse150stablecelllinecontrolgroupandtheoverexpressiongroup,andtherightsideshowstheproteinexpressionoftheEC109celllineknockoutcontrolgroupandthenomoralexpressiongroupofDAB2IP.

安徽医科大学硕士学位论文224.2DAB2IP的表达下调导致辐射引起的凋亡减少为了探究DAB2IP表达与放疗敏感性的关系，我们利用Annexin-V/PI双染法分析辐射引起的凋亡和DAB2IP的关系。如图3所示与相应的对照组EC109-shluc细胞相比，凋亡细胞减少（32.360±5.210％vs17.890±4.65％，P=0.02）。结果显示DAB2IP的表达下调，辐射引起凋亡减少，DAB2IP的表达与辐射的放疗敏感性呈正相关。图3.将EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做2Gy辐射和不做辐射处理，将48h收集到的细胞进行Annexin-V/PI双染法检测流式结果。Fig3.EC109-shlucandEC109-shDAB2IPwereirradiatedwith2Gyandwithoutradiationtreatment,thecellscollectedat48handAnnexinV/PI-stainedcellswereanalysedbyflowcytometry.4.3DAB2IP的表达下调增加了DNA的损伤修复众所周知，细胞的放疗敏感性与DSB的修复能力密切相关,而DSB的修复能力涉及γH2AX的快速磷酸化和DNA损伤中特异性位点P53结合蛋白（53BP1）的募集。在免疫荧光共聚焦中γH2AX和53BP1在DNA双链断裂处表现为离散的聚焦点，用于检测DNA损伤修复的状态。对EC109-shluc和EC109-shDAB2IP做辐射处理和不辐射处理，36h进行53BP1（红色）和磷酸化-γH2AX（绿色）双重免疫荧光染色，通过对聚焦点（黄色）的共定位计数来确定DSB损伤修复的情况。结果显示DAB2IP在EC109细胞的表达下调，导致DNA损伤减少，修复增加（p<0.05）。


本文编号：3458802