长链非编码RNA NEAT1调控肝癌细胞自噬的机制研究
发布时间：2021-10-29 01:53
目的:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）在全球癌症相关死亡率的排名中位列第三位。肝细胞癌晚期易出现转移、复发及临床耐药且预后相对较差。尽管通过手术、放疗、化疗等手段在一定程度上能延缓疾病进展,但大多数患者随着病情发展仍不能避免转移及复发。因此,阐明肝细胞癌发生发展过程,明确其分子调节机制,探索肝细胞癌治疗的针对性靶点具有极其重大的意义。长链非编码RNA NEAT1（Nuclear enriched abundant transcript 1）被认为是一种新型的功能性非编码RNA,是一组长度大于200个核苷酸的非编码RNA,在肿瘤细胞物质循环、能量摄取及代谢重编程等诸多过程中发挥不可替代的调控作用。但NEAT1调控肝癌细胞生命活动过程中的具体机制尚不明确。自噬是应激条件下细胞自我保护的重要方式,自噬水平适当提高有助于肿瘤细胞的生长及耐药。本研究旨在探索NEAT1调控肝癌细胞自噬的机制及其对抗肿瘤药物抵抗能力的影响,致力于提供更多的理论基础来丰富肝细胞癌的发病机制和治疗策略。研究方法:1、通过TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据库...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在多种癌症组织中NEAT1表达上调（a-c）TCGA数据库分析结果提示NEAT1在癌症组织（肝癌、胆管癌、结肠癌）中与癌旁组织相比呈现高表达趋势；（d）NEAT1在肝癌细胞系（HepG2、Huh7、Hep3B及SMMC-7721）
中国医科大学硕士学位论文103.2过表达NEAT1增强了细胞对索拉菲尼的抵抗能力上述数据结果显示NEAT1在肝癌组织及细胞系中异常表达且与预后不良相关。然而，目前研究尚不能明确NEAT1在肝癌细胞中的多种恶性调节过程及具体作用机制。为进一步明确NEAT1的细胞内调控机制，我们使用NEAT1过表达载体构建NEAT1过表达细胞系。构建的细胞系通过PCR进行了转染后表达的测定，转染后NEAT1的表达水平在两种细胞系中分别提高了45倍和55倍（图2a，2b），随后以pcDNA3.1为阴性对照组，使用NEAT1过表达细胞系通过CCK8实验检测细胞活力评估细胞生长情况（图2c，2d）。结果提示pcDNA3.1-NEAT1组降低了索拉菲尼对肿瘤细胞的生长抑制效应（P<0.05）。划痕实验证明pcDNA-3.1-NEAT1组索拉菲尼处理条件下的HepG2和Huh7细胞的迁移能力增强（图2e，2f）。除此之外，NEAT1表达提高后增强了索拉菲尼处理条件下的HepG2和Huh7细胞的集落形成能力（图2g）。以上实验结果证明了NEAT1可能参与调控肝癌临床耐药的过程。图2.索拉菲尼的细胞抑制作用可被NEAT1调节（a-b）NEAT1在HepG2和Huh7细胞系中的转染后表达水平；（c-d）HepG2和Huh7细胞系中细胞活力的测定（CCK8实验）；（e-f）两种细胞系中不同处理因素下细胞迁移能力（HepG2和Huh7）；（g）克隆形成实验评估细胞增殖能力。*P<0.05；**P<0.01。
中国医科大学硕士学位论文113.3NEAT1促进肝癌细胞自噬自噬是细胞内一个进化高度保守的物质代谢循环过程，自噬运送货物使其被降解可产生多种能量物质（如乳酸、氨基酸等）可以回收利用以维持自身生长。近年来，大量的研究都集中研究了长链非编码RNA对药物抵抗的调节，但其调控药物抵抗过程的分子机制尚不能完全明确。目前普遍认为自噬是介导细胞耐药的重要环节和关键调控过程。在本次实验过程中，我们拟深入探究NEAT1在HCC细胞自噬过程的调控方式。通过Westernblot实验检测过表达NEAT1细胞系的LC3表达情况，评价自噬的激活或抑制。Westernblot实验发现在HepG2及Huh7的pcDNA3.1-NEAT1组中LC3II/LC3I比例与pcDNA3.1组相比较明显增加（图3a，3b）。为了进一步判断自噬的激活，我们使用免疫荧光技术检测了LC3表达，结果提示在两种细胞中LC3表达分别增加5.1倍和4.2倍（图3c）。此外投射电镜显示自噬小体明显积累（图3d）。这些结果都提示了自噬小体增加及自噬流的激活。图3.NEAT1促进HCC细胞自噬（a-b）HepG2和Huh7细胞系中过表达NEAT1后Westernblot实验评估自噬水平；（c）免疫荧光标记LC3蛋白检测自噬通量（左侧为pcDNA3.1，右侧图为pcDNA3.1-NEAT1）；（d）透射电镜观测自噬小体情况（左侧为pcDNA3.1，右侧图为pcDNA3.1-NEAT1）。*P<0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6分子轴调控口腔鳞癌细胞的增殖及转移[J]. 陈曦,徐文娣,谭军艳,刘晓斌. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2019(08)
[2]细胞自噬和衰老及衰老相关疾病[J]. 刘爱玲,吕红,钱家鸣. 现代消化及介入诊疗. 2019(04)
[3]Six-long non-coding RNA signature predicts recurrence-free survival in hepatocellular carcinoma[J]. Jing-Xian Gu,Xing Zhang,Run-Chen Miao,Xiao-Hong Xiang,Yu-Nong Fu,Jing-Yao Zhang,Chang Liu,Kai Qu. World Journal of Gastroenterology. 2019(02)
[4]miR-217调控lncRNA MALAT1影响食管鳞癌细胞的生物学行为[J]. 徐健,江跃全,蔡华荣,尹哲,张奇. 中国临床解剖学杂志. 2018(04)
[5]p53相关长链非编码RNA在肿瘤发生发展中作用的研究[J]. 徐艳雪,朱友明,陈乔尔. 安徽医药. 2018(07)
[6]长链非编码RNA TUG1和UCA1在结肠癌组织中的表达及临床意义[J]. 姚凯,朱光辉,单远洲. 中国普通外科杂志. 2018(04)
[7]长链非编码RNA核富集转录体1促进人肝癌细胞增殖和侵袭的研究[J]. 莽源祎,李立,冉江华,张升宁,刘静,李来邦,陈奕明,刘剑,高杨,任刚. 中华实验外科杂志. 2016 (10)
[8]长链非编码RNA调控胃癌侵袭和转移的研究进展[J]. 潘涛,俞振佳,吴熊焰,苏丽萍. 上海交通大学学报(医学版). 2016(09)
[9]长链非编码RNA在肿瘤中的研究进展[J]. 崔宏伟,苏秀兰. 医学研究杂志. 2016(04)
[10]细胞自噬分子机制的进展[J]. 冯文之,陈扬,俞立. 生命科学. 2015(07)
本文编号：3463732
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在多种癌症组织中NEAT1表达上调（a-c）TCGA数据库分析结果提示NEAT1在癌症组织（肝癌、胆管癌、结肠癌）中与癌旁组织相比呈现高表达趋势；（d）NEAT1在肝癌细胞系（HepG2、Huh7、Hep3B及SMMC-7721）
中国医科大学硕士学位论文103.2过表达NEAT1增强了细胞对索拉菲尼的抵抗能力上述数据结果显示NEAT1在肝癌组织及细胞系中异常表达且与预后不良相关。然而，目前研究尚不能明确NEAT1在肝癌细胞中的多种恶性调节过程及具体作用机制。为进一步明确NEAT1的细胞内调控机制，我们使用NEAT1过表达载体构建NEAT1过表达细胞系。构建的细胞系通过PCR进行了转染后表达的测定，转染后NEAT1的表达水平在两种细胞系中分别提高了45倍和55倍（图2a，2b），随后以pcDNA3.1为阴性对照组，使用NEAT1过表达细胞系通过CCK8实验检测细胞活力评估细胞生长情况（图2c，2d）。结果提示pcDNA3.1-NEAT1组降低了索拉菲尼对肿瘤细胞的生长抑制效应（P<0.05）。划痕实验证明pcDNA-3.1-NEAT1组索拉菲尼处理条件下的HepG2和Huh7细胞的迁移能力增强（图2e，2f）。除此之外，NEAT1表达提高后增强了索拉菲尼处理条件下的HepG2和Huh7细胞的集落形成能力（图2g）。以上实验结果证明了NEAT1可能参与调控肝癌临床耐药的过程。图2.索拉菲尼的细胞抑制作用可被NEAT1调节（a-b）NEAT1在HepG2和Huh7细胞系中的转染后表达水平；（c-d）HepG2和Huh7细胞系中细胞活力的测定（CCK8实验）；（e-f）两种细胞系中不同处理因素下细胞迁移能力（HepG2和Huh7）；（g）克隆形成实验评估细胞增殖能力。*P<0.05；**P<0.01。
中国医科大学硕士学位论文113.3NEAT1促进肝癌细胞自噬自噬是细胞内一个进化高度保守的物质代谢循环过程，自噬运送货物使其被降解可产生多种能量物质（如乳酸、氨基酸等）可以回收利用以维持自身生长。近年来，大量的研究都集中研究了长链非编码RNA对药物抵抗的调节，但其调控药物抵抗过程的分子机制尚不能完全明确。目前普遍认为自噬是介导细胞耐药的重要环节和关键调控过程。在本次实验过程中，我们拟深入探究NEAT1在HCC细胞自噬过程的调控方式。通过Westernblot实验检测过表达NEAT1细胞系的LC3表达情况，评价自噬的激活或抑制。Westernblot实验发现在HepG2及Huh7的pcDNA3.1-NEAT1组中LC3II/LC3I比例与pcDNA3.1组相比较明显增加（图3a，3b）。为了进一步判断自噬的激活，我们使用免疫荧光技术检测了LC3表达，结果提示在两种细胞中LC3表达分别增加5.1倍和4.2倍（图3c）。此外投射电镜显示自噬小体明显积累（图3d）。这些结果都提示了自噬小体增加及自噬流的激活。图3.NEAT1促进HCC细胞自噬（a-b）HepG2和Huh7细胞系中过表达NEAT1后Westernblot实验评估自噬水平；（c）免疫荧光标记LC3蛋白检测自噬通量（左侧为pcDNA3.1，右侧图为pcDNA3.1-NEAT1）；（d）透射电镜观测自噬小体情况（左侧为pcDNA3.1，右侧图为pcDNA3.1-NEAT1）。*P<0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6分子轴调控口腔鳞癌细胞的增殖及转移[J]. 陈曦,徐文娣,谭军艳,刘晓斌. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2019(08)
[2]细胞自噬和衰老及衰老相关疾病[J]. 刘爱玲,吕红,钱家鸣. 现代消化及介入诊疗. 2019(04)
[3]Six-long non-coding RNA signature predicts recurrence-free survival in hepatocellular carcinoma[J]. Jing-Xian Gu,Xing Zhang,Run-Chen Miao,Xiao-Hong Xiang,Yu-Nong Fu,Jing-Yao Zhang,Chang Liu,Kai Qu. World Journal of Gastroenterology. 2019(02)
[4]miR-217调控lncRNA MALAT1影响食管鳞癌细胞的生物学行为[J]. 徐健,江跃全,蔡华荣,尹哲,张奇. 中国临床解剖学杂志. 2018(04)
[5]p53相关长链非编码RNA在肿瘤发生发展中作用的研究[J]. 徐艳雪,朱友明,陈乔尔. 安徽医药. 2018(07)
[6]长链非编码RNA TUG1和UCA1在结肠癌组织中的表达及临床意义[J]. 姚凯,朱光辉,单远洲. 中国普通外科杂志. 2018(04)
[7]长链非编码RNA核富集转录体1促进人肝癌细胞增殖和侵袭的研究[J]. 莽源祎,李立,冉江华,张升宁,刘静,李来邦,陈奕明,刘剑,高杨,任刚. 中华实验外科杂志. 2016 (10)
[8]长链非编码RNA调控胃癌侵袭和转移的研究进展[J]. 潘涛,俞振佳,吴熊焰,苏丽萍. 上海交通大学学报(医学版). 2016(09)
[9]长链非编码RNA在肿瘤中的研究进展[J]. 崔宏伟,苏秀兰. 医学研究杂志. 2016(04)
[10]细胞自噬分子机制的进展[J]. 冯文之,陈扬,俞立. 生命科学. 2015(07)
本文编号：3463732
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3463732.html
