MicroRNA-31-5p调控14-3-3ε影响前列腺癌细胞增殖及凋亡的分子机制研究
发布时间：2021-10-31 12:19
前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是全球第二大最常见的男性癌症。几乎所有晚期PCa患者在接受内分泌治疗后都会发展成去势抵抗性前列腺癌。尽管雄激素受体是治疗转移性去势抵抗性前列腺癌（metastatic castrate-resistant prostate cancer,mCRPC）的有效方法,但2018年美国依然有29430人死于PCa。近年来对14-3-3蛋白家族的研究发现,该家族成员14-3-3ε在前列腺癌的发生发展中发挥了重要作用,可能成为前列腺癌诊断治疗的分子靶点。同样,大量研究也证实miRNAs在前列腺癌的发生发展中同样发挥了重要作用,在前列腺癌的分子诊断和靶向治疗方面同样具有广阔的应用前景,然而miRNAs调控14-3-3ε在前列腺癌发生发展中的具体分子机制尚不清楚。本研究采用UALCAN-TCGA在线数据库结合qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕、Transwell、双荧光素酶系统、流式细胞术等试验手段,从细胞水平和分子水平,阐明miRNAs调控14-3-3影响前列腺癌细胞增殖凋亡的分子机制。相关研究可为前列腺癌的分子诊断...
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miR-31-5p与14-3-3ε对22Rv1细胞周期的影响
此外,为了研究miR-31-5p和14-3-3ε对细胞凋亡的影响,我们研究了转染miR-31-5p、NC、pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε对22Rv1细胞凋亡的影响。结果表明,转染miR-31-5p后22Rv1细胞凋亡率和细胞坏死率与其他组相比有极显著性差异(P<0.01);然而,转染pCI-14-3-3ε组则出现相反的结果(图3.11A,B)。有趣的是,当miR-31-5p和pCI-14-3-3ε共转染22Rv1细胞时,miR-31-5p的促凋亡作用在一定程度上被14-3-3ε部分逆转(图3.11 A,B)。以上试验进一步证实,miR-31-5p通过抑制14-3-3ε的表达影响PCa细胞的增殖、侵袭和迁移,促进PCa细胞凋亡。5.讨论
为研究PI3K/AKT/mTOR信号通路是否参与了miR-31-5p调控14-3-3ε对22Rv1细胞增殖的影响,我们通过单独转染miR-31-5p或14-3-3ε,或者共转染miR-31-5p+14-3-3ε,来观察细胞增殖相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR和m TOR的表达情况,分析p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR的比值大小,判断其对抗PCa细胞增殖影响。结果显示:p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值表现出相同的趋势,即转染miR-31-5p组与转染NC组相比,p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值极显著下调(P<0.01);转染pCI-14-3-3ε组与转染pCI-neo组相比,p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值极显著上调(P<0.01);当共转染miR-31-5p+14-3-3ε后,miR-31-5p和14-3-3ε均彼此抑制了两者分别对p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT的调控(图4.1 A,B,C),说明14-3-3ε的补偿,部分逆转了miR-31-5p对PCa细胞增殖蛋白的调控。然而,不同的是在转染miR-31-5p组与转染NC组中,p-mTOR/mTOR与p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT具有相同的趋势,但在转染pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε组中则出现了相反的结果,即转染pCI-14-3-3ε与转染pCI-neo相比,并未引起p-mTOR/mTOR比值的上调,反而转染pCI-14-3-3ε后,mTOR/mTOR比值有所下降;同样,在转染miR-31-5p+14-3-3ε组中,14-3-3ε的补偿,也并未引起m TOR/mTOR比值的部分逆转(图4.1 A,D)。以上结果说明,p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT几个蛋白可能直接参与了miR-31-5p调控14-3-3ε对22Rv1细胞增殖的抑制,而mTOR可能并未参与其中。4.2 miR-31-5p调控14-3-3ε对 BCL-2 信号通路关键蛋白表达的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]14－3－3σ基因在调控内毒素/脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症反应中的作用[J]. 甘春霞,刘名倬,廖新成,付忠华,曾小平,王红梅,郭光华. 中华烧伤杂志. 2020(04)
[2]前列腺癌相关危险因素的研究进展[J]. 孙殿钦,雷林,蔡颖,李贺,曹毛毛,何思怡,于欣阳,彭绩,陈万青. 中国肿瘤. 2020(04)
[3]14-3-3η表达水平对依那西普治疗的类风湿关节炎患者临床应答的预测价值[J]. 王希佳,程佳芬. 药学与临床研究. 2019(06)
[4]前列腺癌的致病因素、肿瘤标志物及前列腺穿刺活检的研究进展[J]. 宋敬福,陈国俊. 世界最新医学信息文摘. 2019(92)
[5]microRNAs与肿瘤及肿瘤干细胞的研究进展[J]. 徐小涛,吉婷婷. 基础医学与临床. 2018(09)
[6]前列腺癌患者血清miRNA-711水平变化及意义[J]. 张仁忠,朱雯银,刘吉文,姜睿. 山东医药. 2018(22)
[7]PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用[J]. 凡治国,李志平,任超. 癌症进展. 2018(05)
[8]MiR-26a靶向调节PTEN对3T3-L1前脂肪细胞分化的促进效应[J]. 宁椿游,李贵林,杨羽晨,马瑶,李明洲,刘海峰. 农业生物技术学报. 2017(08)
[9]14-3-3蛋白在人类疾病中的研究进展[J]. 唐裕福,张怡冰,冯晓东,林绅晖,乔娜,孙忠怡,周文平. 世界华人消化杂志. 2017(06)
[10]miR-21 targets and inhibits tumor suppressor gene PTEN to promote prostate cancer cell proliferation and invasion: An experimental study[J]. Yu Yang,Jia-Xiang Guo,Zhi-Qiang Shao. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(01)
博士论文
[1]MicroRNA-19a通过激活NF-κB信号通路介导胃癌细胞增殖[D]. 杨帆.山东大学 2019
[2]14-3-3蛋白调控Cav2.2通道膜转运机制[D]. 刘丰.上海交通大学 2014
[3]14-3-3ε与RKIP相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究[D]. 严璐.中南大学 2013
硕士论文
[1]14-3-3ε和αN-catenin组织特异性表达及二者之间相互作用的研究[D]. 裴世静.河北医科大学 2007
本文编号：3468123
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miR-31-5p与14-3-3ε对22Rv1细胞周期的影响
此外,为了研究miR-31-5p和14-3-3ε对细胞凋亡的影响,我们研究了转染miR-31-5p、NC、pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε对22Rv1细胞凋亡的影响。结果表明,转染miR-31-5p后22Rv1细胞凋亡率和细胞坏死率与其他组相比有极显著性差异(P<0.01);然而,转染pCI-14-3-3ε组则出现相反的结果(图3.11A,B)。有趣的是,当miR-31-5p和pCI-14-3-3ε共转染22Rv1细胞时,miR-31-5p的促凋亡作用在一定程度上被14-3-3ε部分逆转(图3.11 A,B)。以上试验进一步证实,miR-31-5p通过抑制14-3-3ε的表达影响PCa细胞的增殖、侵袭和迁移,促进PCa细胞凋亡。5.讨论
为研究PI3K/AKT/mTOR信号通路是否参与了miR-31-5p调控14-3-3ε对22Rv1细胞增殖的影响,我们通过单独转染miR-31-5p或14-3-3ε,或者共转染miR-31-5p+14-3-3ε,来观察细胞增殖相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR和m TOR的表达情况,分析p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR的比值大小,判断其对抗PCa细胞增殖影响。结果显示:p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值表现出相同的趋势,即转染miR-31-5p组与转染NC组相比,p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值极显著下调(P<0.01);转染pCI-14-3-3ε组与转染pCI-neo组相比,p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值极显著上调(P<0.01);当共转染miR-31-5p+14-3-3ε后,miR-31-5p和14-3-3ε均彼此抑制了两者分别对p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT的调控(图4.1 A,B,C),说明14-3-3ε的补偿,部分逆转了miR-31-5p对PCa细胞增殖蛋白的调控。然而,不同的是在转染miR-31-5p组与转染NC组中,p-mTOR/mTOR与p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT具有相同的趋势,但在转染pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε组中则出现了相反的结果,即转染pCI-14-3-3ε与转染pCI-neo相比,并未引起p-mTOR/mTOR比值的上调,反而转染pCI-14-3-3ε后,mTOR/mTOR比值有所下降;同样,在转染miR-31-5p+14-3-3ε组中,14-3-3ε的补偿,也并未引起m TOR/mTOR比值的部分逆转(图4.1 A,D)。以上结果说明,p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT几个蛋白可能直接参与了miR-31-5p调控14-3-3ε对22Rv1细胞增殖的抑制,而mTOR可能并未参与其中。4.2 miR-31-5p调控14-3-3ε对 BCL-2 信号通路关键蛋白表达的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]14－3－3σ基因在调控内毒素/脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症反应中的作用[J]. 甘春霞,刘名倬,廖新成,付忠华,曾小平,王红梅,郭光华. 中华烧伤杂志. 2020(04)
[2]前列腺癌相关危险因素的研究进展[J]. 孙殿钦,雷林,蔡颖,李贺,曹毛毛,何思怡,于欣阳,彭绩,陈万青. 中国肿瘤. 2020(04)
[3]14-3-3η表达水平对依那西普治疗的类风湿关节炎患者临床应答的预测价值[J]. 王希佳,程佳芬. 药学与临床研究. 2019(06)
[4]前列腺癌的致病因素、肿瘤标志物及前列腺穿刺活检的研究进展[J]. 宋敬福,陈国俊. 世界最新医学信息文摘. 2019(92)
[5]microRNAs与肿瘤及肿瘤干细胞的研究进展[J]. 徐小涛,吉婷婷. 基础医学与临床. 2018(09)
[6]前列腺癌患者血清miRNA-711水平变化及意义[J]. 张仁忠,朱雯银,刘吉文,姜睿. 山东医药. 2018(22)
[7]PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用[J]. 凡治国,李志平,任超. 癌症进展. 2018(05)
[8]MiR-26a靶向调节PTEN对3T3-L1前脂肪细胞分化的促进效应[J]. 宁椿游,李贵林,杨羽晨,马瑶,李明洲,刘海峰. 农业生物技术学报. 2017(08)
[9]14-3-3蛋白在人类疾病中的研究进展[J]. 唐裕福,张怡冰,冯晓东,林绅晖,乔娜,孙忠怡,周文平. 世界华人消化杂志. 2017(06)
[10]miR-21 targets and inhibits tumor suppressor gene PTEN to promote prostate cancer cell proliferation and invasion: An experimental study[J]. Yu Yang,Jia-Xiang Guo,Zhi-Qiang Shao. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2017(01)
博士论文
[1]MicroRNA-19a通过激活NF-κB信号通路介导胃癌细胞增殖[D]. 杨帆.山东大学 2019
[2]14-3-3蛋白调控Cav2.2通道膜转运机制[D]. 刘丰.上海交通大学 2014
[3]14-3-3ε与RKIP相互作用对胃癌发生发展的影响及其机制研究[D]. 严璐.中南大学 2013
硕士论文
[1]14-3-3ε和αN-catenin组织特异性表达及二者之间相互作用的研究[D]. 裴世静.河北医科大学 2007
本文编号：3468123
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