乙酰肝素酶调节β-catenin/MMP7通路介导肝癌的侵袭和迁移的初步研究
发布时间：2021-11-21 02:07
目的:探索乙酰肝素酶（HPSE）在肝癌侵袭迁移过程中的生物学功能影响,揭示HPSE与β-catenin/MMP7通路间潜在的机制。方法:用HPSE RNAi细胞慢病毒（Lv）转染HepG2肝癌细胞系作为实验细胞株;通过qRT-PCR和Western-blot技术检测转染细胞中HPSE的基因转录和蛋白表达水平。用平板克隆实验检测HPSE对肝癌细胞增殖的影响。用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用qRT-PCR和Western-blot检测肝癌细胞中β-catenin、MMP7及上皮间质转化相关因子E-cadherin、Vimentin的基因转录和蛋白表达。通过裸鼠成瘤体内实验验证HPSE对肝癌的影响。结果:1、HPSE RNAi三组中,Lv转染的HepG2细胞HPSE的mRNA转录水平均明显低于阴性对照组（mock组）（p<0.05）;Western-blot显示RNAi干扰组中HPSE蛋白表达明显低于mock组。2、克隆形成实验结果显示:HPSE干扰组增殖率明显低于mock组（p<0.05）。3、划痕实验结果显示:HPSE干扰组划痕距离缩短,但是与m...
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜下观察的HPSEmock和RNAi慢病毒转染HepG2细胞A：HPSEmock慢病毒转染HepG2细胞后（SP×200，标记绿色荧光蛋白）
观察鉴定慢病毒转染是否转染成功并保存照片。如图 荧光显微镜下观察的 HPSE mock 和 RNAi 慢病毒转染 HepGE mock 慢病毒转染HepG2细胞后（SP×200，标记绿色荧光蛋E RNAi 慢病毒转染HepG2细胞后（SP×400，标记绿色荧光蛋mock和RNAi 慢病毒颗粒分别转染 HepG2 肝癌细胞系，转染观察到携带目的基因的稳转细胞株。由图1.可知，慢病毒颗粒携胞内，各组细胞轮廓清晰，荧光强度较弱但是效果基本满意。慢病毒干扰的 HepG2 肝癌细胞系的构建慢病毒转染 HepG2 细胞后，是否抑制 HPSE 基因及其 检测 HPSE 基因转录情况，如图 2.所示。
皖南医学院硕士学位论文<0.01，***：p﹤0.001，SNQ检验）；其中HPSE RNAi-3组 的HepG2细胞达量低于RNAi-1、2中的表达量。estern-Blot 检测 HPSE 蛋白的表达进一步验证慢病毒转染 HepG2 细胞后，HPSE 蛋白表达是否受 Western-Blot 检测 HPSE 蛋白表达情况，如图 3.所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移[J]. 陈晓鹏,江雯,张文君,崔巍. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(05)
[2]肝素酶介导的裸鼠肝癌门静脉微瘤栓形成[J]. 陈晓鹏,岳朝辅,卢林明,张文君. 第三军医大学学报. 2016(21)
[3]人参皂苷Rh2通过激活Gsk-3β削弱β-catenin在肝癌HepG2细胞中的作用[J]. 石庆强,左国伟,冯子强,赵绿翠,罗念,游智梅,夏菁,李丹阳,李静,陈地龙. 中国免疫学杂志. 2015(11)
[4]Hedgehog信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用[J]. 刘佳,朱琴梅,胡弘毅,王甦. 临床肝胆病杂志. 2015(02)
[5]转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响[J]. 张彩虹,肖文华,董伟伟,赵惠霞,段昕妤,李秋文,郝怡鑫,王如良,朱建华,叶明. 临床肿瘤学杂志. 2014(05)
[6]Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J]. Minal Garg. World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[7]Hedgehog信号通路及EMT在进展期胃癌中的作用及意义[J]. 王栈山,李继坤. 医学研究杂志. 2013(09)
[8]姜黄素对肝癌细胞Bel7402、QGY7703增殖凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响[J]. 赵琳琳,陈剑群,徐学军. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(11)
[9]中国乙型肝炎的流行及疫苗研究[J]. 王萍. 医学动物防制. 2012(08)
[10]Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer progression and metastasis[J]. Binhua P.Zhou. 癌症. 2011(09)
博士论文
[1]上皮间质转化在调控肝癌恶性生物学行为中的作用及其机制研究[D]. 徐志远.浙江大学 2013
硕士论文
[1]肝素酶参与肝癌门静脉瘤栓形成的组织学证据研究[D]. 岳朝辅.皖南医学院 2015
本文编号：3508544
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
荧光显微镜下观察的HPSEmock和RNAi慢病毒转染HepG2细胞A：HPSEmock慢病毒转染HepG2细胞后（SP×200，标记绿色荧光蛋白）
观察鉴定慢病毒转染是否转染成功并保存照片。如图 荧光显微镜下观察的 HPSE mock 和 RNAi 慢病毒转染 HepGE mock 慢病毒转染HepG2细胞后（SP×200，标记绿色荧光蛋E RNAi 慢病毒转染HepG2细胞后（SP×400，标记绿色荧光蛋mock和RNAi 慢病毒颗粒分别转染 HepG2 肝癌细胞系，转染观察到携带目的基因的稳转细胞株。由图1.可知，慢病毒颗粒携胞内，各组细胞轮廓清晰，荧光强度较弱但是效果基本满意。慢病毒干扰的 HepG2 肝癌细胞系的构建慢病毒转染 HepG2 细胞后，是否抑制 HPSE 基因及其 检测 HPSE 基因转录情况，如图 2.所示。
皖南医学院硕士学位论文<0.01，***：p﹤0.001，SNQ检验）；其中HPSE RNAi-3组 的HepG2细胞达量低于RNAi-1、2中的表达量。estern-Blot 检测 HPSE 蛋白的表达进一步验证慢病毒转染 HepG2 细胞后，HPSE 蛋白表达是否受 Western-Blot 检测 HPSE 蛋白表达情况，如图 3.所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移[J]. 陈晓鹏,江雯,张文君,崔巍. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2016(05)
[2]肝素酶介导的裸鼠肝癌门静脉微瘤栓形成[J]. 陈晓鹏,岳朝辅,卢林明,张文君. 第三军医大学学报. 2016(21)
[3]人参皂苷Rh2通过激活Gsk-3β削弱β-catenin在肝癌HepG2细胞中的作用[J]. 石庆强,左国伟,冯子强,赵绿翠,罗念,游智梅,夏菁,李丹阳,李静,陈地龙. 中国免疫学杂志. 2015(11)
[4]Hedgehog信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用[J]. 刘佳,朱琴梅,胡弘毅,王甦. 临床肝胆病杂志. 2015(02)
[5]转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响[J]. 张彩虹,肖文华,董伟伟,赵惠霞,段昕妤,李秋文,郝怡鑫,王如良,朱建华,叶明. 临床肿瘤学杂志. 2014(05)
[6]Epithelial-mesenchymal transition-activating transcription factors-multifunctional regulators in cancer[J]. Minal Garg. World Journal of Stem Cells. 2013(04)
[7]Hedgehog信号通路及EMT在进展期胃癌中的作用及意义[J]. 王栈山,李继坤. 医学研究杂志. 2013(09)
[8]姜黄素对肝癌细胞Bel7402、QGY7703增殖凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响[J]. 赵琳琳,陈剑群,徐学军. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(11)
[9]中国乙型肝炎的流行及疫苗研究[J]. 王萍. 医学动物防制. 2012(08)
[10]Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer progression and metastasis[J]. Binhua P.Zhou. 癌症. 2011(09)
博士论文
[1]上皮间质转化在调控肝癌恶性生物学行为中的作用及其机制研究[D]. 徐志远.浙江大学 2013
硕士论文
[1]肝素酶参与肝癌门静脉瘤栓形成的组织学证据研究[D]. 岳朝辅.皖南医学院 2015
本文编号：3508544
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