miR-27a对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制的研究

发布时间：2021-11-22 22:51

　　目的:胃癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,其死亡率位于恶性肿瘤第二位。虽然胃癌治疗方式有一定进展,但治愈率并没有得到相应的提高。因此寻找新的治疗靶点具有重要的临床意义。日益增多的研究表明miRNAs参与了癌细胞增殖、分化、凋亡及侵袭等过程,且miRNAs可因被包裹于外泌体中而在体液中稳定存在。我们前期的研究发现在胃癌患者血清中miR-27a,miR-20、miR-34a、miR-1和miR-423-5p呈稳定的高表达状态,进一步收集病例资料发现miR-27a高表达的患者预后不良,提示miR-27a可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用。目前,miR-27a对胃癌的具体作用及机制尚不清楚。本研究旨在前期研究结果的基础上探索miR-27a在胃癌细胞外泌体中表达情况,研究miR-27a对胃癌细胞恶性生物学行为影响及机制,以期寻找到胃癌治疗新途径。方法:1.miR-27a在胃癌细胞外泌体中表达情况:Exoquick TC法收集胃癌细胞SGC-7901培养上清中的外泌体,通过透射电镜及Western blotting观察所收集的外泌体形态及其标志物,BCA-kit检测外泌体中蛋白浓度。实时聚合酶链式反应... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

透射电镜观察到囊泡状的外泌体

天津医科大学硕士学位论文 结果结果1 胃癌细胞外泌体中 miR-27a 的表达透射电镜下观察 SGC-7901 外泌体为椭圆形或圆形的囊泡状小体，直径约30-100nm， Western blotting 检测 SGC-7901 细胞上清中外泌体标志物 CD63 高表达，BCA-kit 检测外泌体中蛋白浓度为 0.6ug/ul，与 PBS 中蛋白浓度差异显著。实时聚合酶链式反应 (Realtime PCR)检测收集的外泌体中 5 种 miRNA 的表达水平，结果显示 miR-27a, miR-20 和 miR-34a 表达量较高, 而 miR-1 和 miR-423-5p表达量较低，且 miR-27a 表达随着外泌体浓度升高而升高，表明胃癌细胞外泌体中 miR-27a 高表达（图 1）。Exosome PBS

图 1 胃癌细胞培养上清中外泌体提取、鉴定及 miR-27a 在胃癌细胞外泌体中表达情况2 miR-27a 过表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响CCK-8 法检测结果显示，上调 SGC-7901 细胞 miR-27a 后的细较对照组加快( P＜0.05)。流式细胞仪检测结果显示，与 NC 组相比较mimics 转染 48 小时后可显著抑制 SGC-7901 细胞凋亡（P<0.05）。上组凋亡相关蛋白 p53 水平下降，BCL-2 表达上调，自噬相关蛋白 L表达下降（P<0.05）(图 2)。miR-27aNC0.00.51.01.5SurvivalRate***图 2.1 miR-27a 过表达促进 SGC-7901 细胞增殖

【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖[J]. 周立斌,凡杰,刘勇超,张长存,尹冰德,洪艳.  现代肿瘤医学. 2012(02)



本文编号：3512595