长链非编码RNA相对定量PCR检测方法建立及其在非小细胞肺癌中的初步验证
发布时间：2021-12-10 14:30
[目的]肺癌是全世界癌症相关死亡最常见的原因,非小细胞肺癌占所有肺癌病例的85%,尽管目前在治疗方面已经取得了许多积极进展,但患者的总体生存率仍然较低。大多数患者在诊断时已经发生淋巴结转移,预后不良。急需开发创伤性小且特异度、灵敏度较高,能够早期诊断肺癌的新型生物标志物。越来越多的证据证明了 lncRNA参与非小细胞肺癌发生发展的过程,本次课题基于前期研究基础,在lncRNA芯片结果中挑选一批有潜在价值的lncRNA进行研究,构建相对定量的实时荧光定量PCR检测方法,寻找有潜力作为新型的肿瘤诊断生物标志物的lncRNA分子,为其进一步的功能研究奠定基础,为非小细胞肺癌早期诊断治疗以及预后评估提供新思路。[方法]应用课题组前期LncRNA+mRNA表达谱芯片结果,筛选出8条有潜力作为诊断标志物的候选lncRNA。随后发现其中3条lncRNA分子无法设计适宜引物探针遂进行剔除。紧接着,我们构建多重荧光定量PCR检测方法,验证5条lncRNA分子在20对非小细胞肺癌组织和配对组织以及42例非小细胞肺癌组血清,46例良性肺疾病组血清,48例健康组血清中的表达情况,使用Mann-Whitney非...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ＩｎｃＲＮＡ聚类分析结果??２５??
２目的基因的筛选??２．１共有表达基因的筛选??本课题的目的为筛选能够作为非小细胞肺癌诊断标志物的ＩｎｃＲＮＡ分子，只??有能在大多数个体中表达的分子才有潜力作为诊断标志物。因此，根据表达一致??性原则，我们筛选出在样本间共有表达的ＩｎｃＲＮＡ分子，见图３。图中筛选出的??ＩｎｃＲＮＡ为在２３对肺癌组织和癌旁组织样本中１８对样本所共有表达上调的１２??条?ＩｎｃＲＮＡ?〇??§＿?３９０??Ｍ，?ＥＮＳＧ０００００２４９８５９．２?■■??＜?ＥＮＳＧ０００００２５６５６４．１??Ｚ?ＥＮＳＧ０００００２５７９２４１??〇?ｏ?ＥＮＳＧ０００００２６２８８０?１??—Ｌ０Ｃ１４５８３７?２７９?Ｉ??＂Ｓ?ｎｃ－ＨＯＸＣ９－１３９??ｒｏ?ＸＬＯＣ＿００５２２１??｜ｇ＿?ＸＬＯＣ３〇４４４１?１８９?Ｉ??＾?°?ＸＬＯＣ＿００９６７７??＝?ＩＥＮＳＧ０００００２６３５８５１１??〇?ＬＩＴ３４６４?１１７??Ｉ?ＪＸＬＱＣ－Ｑ０？５２７?７５?■■■■??ｚ〇．?■ＯＵＬＪＵＵ??２３?２２?２１?２０?１９?１８?１７?１６?１５?１４?１３?１２??Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓａｍｐｌｅｓ??图３共有表达上调的ＩｎｃＲＮＡ??２．２目的基因的筛选??２．?２．?１进一步挑选出其中基因差异表达倍数ＦＣ?（ａｂｓ）彡２以及；？彡０．０５的高表达??ＩｎｃＲＮＡ，最终挑选出８条ＩｎｃＲＮＡ，见表１１。（ＦＣ由高到低排序）??表１１挑选出的差异表达的ＩｎｃＲＮＡ??ＬｎｃＲＮＡ?Ｎａｍｅ?Ｐ?ＦＣ?Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
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【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展[J]. 梁子英,刘芳. 现代农业科技. 2020(06)
[2]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[3]全球女性乳腺癌流行情况研究[J]. 师金,梁迪,李道娟,王立群,靳晶,张亚琛,贺宇彤. 中国肿瘤. 2017(09)
[4]长链非编码RNAFENDRR对宣威肺癌XWLC-05细胞增殖、迁移及侵袭的影响[J]. 陈冉,王玉明,段勇,张艳亮,宋贵波,吴春燕,孙岩,杜娜,肖成. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2017(07)
[5]长链非编码RNA研究进展[J]. 杨峰,易凡,曹慧青,梁子才,杜权. 遗传. 2014(05)
[6]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 陈旭,齐凤坤,康立功,李景富. 东北农业大学学报. 2010(08)
[7]实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择[J]. 陈凤花,王琳,胡丽华. 临床检验杂志. 2005(05)
硕士论文
[1]FENDRR在宣威地区人群肺癌发生发展中分子机制的初步探讨[D]. 赵瑜.昆明医科大学 2019
[2]云南宣威肺癌相关LncRNAs的初步筛选及表达研究[D]. 李庆.昆明医科大学 2015
本文编号：3532802
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ＩｎｃＲＮＡ聚类分析结果??２５??
２目的基因的筛选??２．１共有表达基因的筛选??本课题的目的为筛选能够作为非小细胞肺癌诊断标志物的ＩｎｃＲＮＡ分子，只??有能在大多数个体中表达的分子才有潜力作为诊断标志物。因此，根据表达一致??性原则，我们筛选出在样本间共有表达的ＩｎｃＲＮＡ分子，见图３。图中筛选出的??ＩｎｃＲＮＡ为在２３对肺癌组织和癌旁组织样本中１８对样本所共有表达上调的１２??条?ＩｎｃＲＮＡ?〇??§＿?３９０??Ｍ，?ＥＮＳＧ０００００２４９８５９．２?■■??＜?ＥＮＳＧ０００００２５６５６４．１??Ｚ?ＥＮＳＧ０００００２５７９２４１??〇?ｏ?ＥＮＳＧ０００００２６２８８０?１??—Ｌ０Ｃ１４５８３７?２７９?Ｉ??＂Ｓ?ｎｃ－ＨＯＸＣ９－１３９??ｒｏ?ＸＬＯＣ＿００５２２１??｜ｇ＿?ＸＬＯＣ３〇４４４１?１８９?Ｉ??＾?°?ＸＬＯＣ＿００９６７７??＝?ＩＥＮＳＧ０００００２６３５８５１１??〇?ＬＩＴ３４６４?１１７??Ｉ?ＪＸＬＱＣ－Ｑ０？５２７?７５?■■■■??ｚ〇．?■ＯＵＬＪＵＵ??２３?２２?２１?２０?１９?１８?１７?１６?１５?１４?１３?１２??Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓａｍｐｌｅｓ??图３共有表达上调的ＩｎｃＲＮＡ??２．２目的基因的筛选??２．?２．?１进一步挑选出其中基因差异表达倍数ＦＣ?（ａｂｓ）彡２以及；？彡０．０５的高表达??ＩｎｃＲＮＡ，最终挑选出８条ＩｎｃＲＮＡ，见表１１。（ＦＣ由高到低排序）??表１１挑选出的差异表达的ＩｎｃＲＮＡ??ＬｎｃＲＮＡ?Ｎａｍｅ?Ｐ?ＦＣ?Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
６?ｕｐ?２?＋??ＥＮＳＧ０００００２５６５６４．１?５．３０Ｅ－０４?３．６９?ｕｐ?１２?＋??ＸＬＯＣ—０００５２７?１．１９Ｅ－０９?３．２２?ｕｐ?１?＋??ＥＮＳＧ０００００２４９８５９．２?１．６２Ｅ－０４?２．９０?ｕｐ?８?＋??２．２．２在２３对肺癌患者癌组织和癌旁组织中芯片检测结果显示，相对于癌旁组??织，８条ＩｎｃＲＮＡ都呈高表达状态，且表达一致性较好（除个别样本外，在２３??对样本中都为高表达状态），有作为诊断标志物的潜力。见图４－图１１。??门?ＸＬＯＣ＿００９６７７?门??ｃ－｜?Ｉ?：???Ｉ?－??ｎ?ｎ?ｎ?ｃｎ??１〇－?■???Ｉ???—?—???Ｉ?—?１???—????Ｉ?Ｉ?—??Ｉ?—??ｈａ?Ｉ?Ｉ?ｉ?ｌ?Ｉ?ｎ?１?？?ｓ?ｉ?ｎ??腿：疆ｌｌｉｉｉｉｉ??ｖ?ｖ－?〇?Ｃｊ?ＣＤ?Ｏ?Ｏ?ＣＪ?Ｗ?ｇＴ＞?ＣＤ?Ｑ?Ｑ?〇?ＣＤ?ＣＤ?Ｑ?Ｏ?ｖ?Ｑ?Ｑ?Ｃｊ?〇?〇?？—?ｖ?ｒ￣?ｒ?ｗ￣??ｔ－?ｔ－?ｍ?ｉｒ＞?ｉｎ?ｔｒｉ?ｉｒ＞?ｔｒｉ?ｕ￣＞?ｉｎ?ｕｉ?＾?ｒｓｊ?ｏ＜ｉ?？—?？－?ｒｘ?（Ｎ??ｖ?ｗ＂＂?ｗ－￣?＾?ｗ—?ｗ—?＾?＾?ｗ—?Ｖ?＾?＾?＾?＾?＾?ｗ￣?ｗ—?ｗ—?ｗ—??ｏ１?卜１?〇丨卜丨?＜＿）＿?卜＿?〇丨卜丨?ＣＪ１?卜＿?ｏＶ１０１?卜＿?ｏＶ１?Ｌ）１?？－＿?〇丨卜１?（Ｊ＿?卜，ｕＶ１０１?卜１?〇＿?卜＿?（Ｊ１１－丨?〇丨?ｌ－＇Ｏ１?卜１?〇＿?？－＿〇？卜１?〇＿卜丨?〇丨》－＿?Ｏ１??ｎ?厂］厂Ｉ厂！厂］厂Ｉ厂Ｉ
【参考文献】：
期刊论文
[1]实时荧光定量PCR技术及其应用研究进展[J]. 梁子英,刘芳. 现代农业科技. 2020(06)
[2]中国城市癌症早诊早治项目进展[J]. 陈万青,李霓,石菊芳,任建松,陈宏达,李江,代敏,赫捷. 中国肿瘤. 2019(01)
[3]全球女性乳腺癌流行情况研究[J]. 师金,梁迪,李道娟,王立群,靳晶,张亚琛,贺宇彤. 中国肿瘤. 2017(09)
[4]长链非编码RNAFENDRR对宣威肺癌XWLC-05细胞增殖、迁移及侵袭的影响[J]. 陈冉,王玉明,段勇,张艳亮,宋贵波,吴春燕,孙岩,杜娜,肖成. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2017(07)
[5]长链非编码RNA研究进展[J]. 杨峰,易凡,曹慧青,梁子才,杜权. 遗传. 2014(05)
[6]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 陈旭,齐凤坤,康立功,李景富. 东北农业大学学报. 2010(08)
[7]实时荧光定量RT-PCR内参基因的选择[J]. 陈凤花,王琳,胡丽华. 临床检验杂志. 2005(05)
硕士论文
[1]FENDRR在宣威地区人群肺癌发生发展中分子机制的初步探讨[D]. 赵瑜.昆明医科大学 2019
[2]云南宣威肺癌相关LncRNAs的初步筛选及表达研究[D]. 李庆.昆明医科大学 2015
本文编号：3532802
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