Linc00673/miR-150-5p/ZEB1轴在非小细胞肺癌中的调控功能及预后价值研究

发布时间：2021-12-12 12:45

　　背景与目的:肺癌是全球人口中发病率最高的肿瘤性疾病,也是导致癌症相关死亡的最主要原因之一。肺癌的转移是导致患者预后不佳的重要因素,而上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是肺癌转移过程中的关键事件。既往有许多研究报道了长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）在包括非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）在内的多种肿瘤中发挥重要的调控作用。本研究旨在探索lnc RNA linc00673在NSCLC中对细胞增殖、迁移、侵袭能力以及EMT过程的调控功能及其在NSCLC中的预后价值,并进一步探索其发挥调控功能的分子机制。方法:采用CCK-8实验和EdU实验检测细胞的增殖能力;采用划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR被用于检测各种RNA分子的表达水平和EMT标志物的转录水平;蛋白免疫印迹实验和免疫荧光实验被用于检测EMT标志物的蛋白表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验检测微小RNA（micro RNA,miRNA）与靶基... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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1各细胞系中linc00673的相对表达水平

浙江大学博士学位论文正文结果21为了探索linc00673在非小细胞肺癌中发挥的生物学功能，我们使用了小干扰RNA来降低细胞中linc00673的表达水平。在linc00673高表达的细胞系A549和H1975中，我们针对linc00673的序列设计了特异性靶向的siRNA来敲降其表达水平，其中si-L3和si-L5两条siRNA干扰效率较高，在后续实验中被继续采用（图3.1.2A-B）。图3.1.2细胞内linc00673表达水平的敲降。在（A）A549细胞和（B）H1975细胞中，使用5条siRNA敲降linc00673的表达水平，qRT-PCR检测显示si-L3和si-L5两条siRNA干扰效率最佳。NC，阴性对照。***P<0.005。因为与正常支气管上皮细胞相比，linc00673在非小细胞肺癌细胞中的表达显著上调，所以我们推测linc00673在非小细胞肺癌中或许发挥了促进肿瘤发生发展的作用。我们首先通过CCK-8实验检测了linc00673对非小细胞肺癌体外增殖的影响，发现使用siRNA敲降A549和H1975两株细胞内linc00673的表达水平后，两细胞系的体外增殖能力在转染24h后就已经受到显著抑制（图3.1.3A-B）；类似地，我们又在A549和H1975细胞中进行了EdU增殖实验来检测细胞的DNA复制活性，发现在转染siRNA敲降linc00673表达水平的24h后，仍处于活动增

浙江大学博士学位论文正文结果22殖中的细胞数量显著降低（图3.1.3C-D）。因此，我们证明了linc00673对非小细胞肺癌细胞的体外增殖具有重要的促进作用。图3.1.3Linc00673促进非小细胞肺癌体外增殖。分别使用2条siRNA敲降（A）A549和（B）H1975细胞中linc00673的表达水平后，CCK-8增殖实验显示细胞在450nm吸光值（OD450）显著降低，即增殖受到抑制；类似地，EdU实验（C-D）结果显示在使用siRNA敲降linc00673表达水平后，DNA复制活动水平下降，细胞增殖受到显著抑制。EdU，标记有复制活性的DNA分子。Hoechst，标记细胞核。NC，阴性对照。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.005。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Knockdown of long non-coding RNA LCPAT1 inhibits autophagy in lung cancer[J]. Xiao Yu,Xiaofei Ye,Hongyan Lin,Nannan Feng,Sumeng Gao,Xiaohong Zhang,Yu Wang,Herbert Yu,Xiaobei Deng,Biyun Qian.  Cancer Biology & Medicine. 2018(03)



本文编号：3536701