E3连接酶RNF38泛素化降解DSG1蛋白促进NSCLC侵袭转移研究

发布时间：2023-03-07 20:19

　　肺癌是所有恶性肿瘤中发病率最高、病死率最高的一种疾病,目前已是世界范围内恶性肿瘤致死的首位因素。2018年中国最新癌症报告显示,中国每年肺癌发病约78.1万,死亡病例约62.6万。根据生物学特性,肺癌可分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)两大类。其中,NSCLC占所有病例的80%⁸5%。虽然肺癌的基础研究和治疗方面取得了一些突破,但近30年来肺癌患者的5年生存率仍然停留在15%左右。肺癌的侵袭和转移能力强是导致肺癌治疗效果不佳的罪魁祸首,临床上近80%的NSCLC在确诊时已经发生了区域淋巴结或者远处脏器的转移。因此深入揭示肺癌侵袭和转移的分子机制具有重要的理论和临床价值,通过对这些分子的检测,不仅有助于判断肺癌的转移与预后,而且也可为阻断肺癌的侵袭和转移提供了有价值的分子靶标。蛋白质的泛素化降解途径是泛素与一系列关联酶协同作用,降解泛素化的蛋白质的过程。这一过程中的系列关联酶主要由泛素激活酶(Ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素结合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme,E2)与泛素连接酶(U...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
英文缩略词
前言
第一部分 E3连接酶RNF38在NSCLC中表达及与NSCLC临床病理参数的关系
    1.1. 材料与方法
        1.1.1. 材料
            1.1.1.1 .组织标本
            1.1.1.2 .主要试剂和耗材
            1.1.1.3 .主要实验仪器
        1.1.2. 方法
            1.1.2.1 .组织RNA的抽提
            1.1.2.2 .cDNA的合成
            1.1.2.4 .组织蛋白的提取
            1.1.2.5 .BCA法蛋白浓度测定
            1.1.2.6 .蛋白免疫印迹(WesternBlot)
            1.1.2.7 .组织芯片及免疫组织化学染色
            1.1.2.8 .免疫组化结果判定
            1.1.2.9 .统计分析
    1.2 .结果
        1.2.1 .RNF38在NSCLC组织中的表达高于相应癌旁组织
        1.2.2 .大样本免疫组化结果进一步证实RNF38在NSCLC中高表达
        1.2.3 .RNF38表达与NSCLC癌患临床病理特征间的关系
    1.3 .讨论
    1.4 .结论
第二部分 RNF38诱导细胞上皮-间质转化促进NSCLC侵袭转移
    2.1 .材料与方法
        2.1.1 .材料
            2.1.1.1 .细胞株
            2.1.1.2 .干扰质粒
            2.1.1.3 .主要试剂和耗材
            2.1.1.4 .主要实验仪器
        2.1.2 .方法
            2.1.2.1 .细胞复苏
            2.1.2.2 .细胞培养
            2.1.2.3 .细胞传代
            2.1.2.4 .细胞冻存
            2.1.2.5 .细胞RNA的抽提
            2.1.2.6 .Real-timePCR
            2.1.2.7 .细胞蛋白的提取
            2.1.2.8 .蛋白免疫印迹
            2.1.2.9 .慢病毒转染贴壁细胞
            2.1.2.10 .shRNA干扰效率检测
            2.1.2.11 .Transwell小室侵袭迁移细胞实验
            2.1.2.12 .细胞划痕实验
            2.1.2.13 .CCK-8实验
            2.1.2.14 .细胞免疫荧光检测
            2.1.2.15 .统计分析
    2.2 .结果
        2.2.1 .在NSCLC细胞系及正常细胞中检测RNF38的表达情况
        2.2.2 .shRNA干扰细胞模型构建
        2.2.3 .RNF38对NSCLC细胞侵袭能力的影响
        2.2.4 .RNF38对NSCLC细胞迁移能力的影响
        2.2.5 .RNF38对NSCLC增殖能力的影响
        2.2.6 .RNF38可诱导上皮间质转化
    2.3 .讨论
    2.4 .结论
第三部分 RNF38泛素化降解DSG1蛋白参与NSCLC侵袭转移
    3.1 .材料与方法
        3.1.1 .材料
            3.1.1.1 .细胞株
            3.1.1.2 .干扰、标签质粒
            3.1.1.3 .主要试剂和耗材
            3.1.1.4 .主要实验仪器
        3.1.2 方法
            3.1.2.1 .免疫共沉淀
            3.1.2.3 .蛋白免疫印迹
            3.1.2.4 .qRT-PCR
            3.1.2.5 .细胞转染及鉴定
            3.1.2.6 .Transwell小室细胞实验
            3.1.2.7 .统计分析
    3.2 .结果
        3.2.1 .免疫共沉淀后质谱分析
        3.2.2 .Desmoglein-1为RNF38底物
        3.2.3 .DSG1在NSCLC细胞中表达
        3.2.4 .进一步确立RNF38与DSG1间的相互作用
        3.2.5 .NSCLC细胞中RNF38蛋白表达对DSG1蛋白影响
        3.2.6 .DSG1影响RNF38功能
    3.3 .讨论
    3.4 .结论
第四部分 RNF38与DSG1蛋白表达与NSCLC癌患者预后相关
    4.1 .材料与方法
        4.1.1 .材料
            4.1.1.2 .主要试剂和耗材
        4.1.2 .方法
            4.1.2.4 .免疫组化结果判定
            4.1.2.5 .统计分析
    4.2 .结果
        4.2.1 .组织芯片免疫组化进一步证实DSG1在NSCLC中的表达与RNF38之间的关系
        4.2.2 .RNF38/DSG1表达与NSCLC患者临床病理参数的关系
        4.2.3 .RNF38与DSG1表达与NSCLC患者预后的关系
    4.3 .讨论
    4.4 .结论
总结
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果
    一、已发表论文
综述
    参考文献



本文编号：3757823