CircCYP24A1在HBx诱导人肝细胞癌上皮-间质转化促进肿瘤侵袭转移过程中的作用研究

发布时间：2023-04-21 23:41

　　目的:肝细胞癌(HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,以预后差,易发生早期转移为著。从全球范围来看,慢性乙型肝炎病毒(HBV)以及丙型肝炎病毒(HCV)感染占全世界肝癌患者的75%-80%,其中,撒哈拉以南非洲和东亚是肝细胞癌的重灾区,中国肝癌患者数量就达世界患者总数的50%以上,这与其巨大的HBV感染人群是分不开的。早期浸润、转移和复发等生物学行为,使得肝癌的临床治疗成为当今难以攻克的课题,其中上皮-间质转化(EMT)被认为是肿瘤侵袭转移的关键步骤,肿瘤细胞通过EMT过程获取了强大的侵袭和转移能力,可以脱离原发灶向其他组织和器官运动,而同时,HBV的X基因所表达的X蛋白(HBx)在促进肝细胞癌的上皮-间质转化过程,参与肿瘤的侵袭和转移,推动肿瘤的进展中,发挥重要作用。为了研究HBx促进肝细胞癌上皮-间质转化的机制,本课题拟明确HBx是否可以通过circRNA/miRNA/mRNA的内源竞争RNA机制(ceRNA)促进肝细胞癌的上皮-间质转化过程,并找出其中发挥关键作用的circRNA,研究其促进肿瘤侵袭转移的具体机制。研究方法:首先选择HepG2细胞系作为主要研究细胞,并使用慢病...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :HBx通过诱导HepG2 细胞上皮-间质转化促进侵袭能力
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要实验仪器
        2.2 研究对象和分组
        2.3 研究方法
            2.3.1 细胞复苏
            2.3.2 细胞传代
            2.3.3 细胞冻存
            2.3.4 过表达载体的构建
            2.3.5 慢病毒转染
            2.3.6 稳转株筛选
            2.3.7 细胞染色
            2.3.8 Western Bolt
            2.3.9 Transwell侵袭迁移实验
            2.3.10 统计学处理
    3 结果
        3.1HBx稳定过表达HepG2 细胞发生上皮-间质转化,E-cadherin蛋白低表达,N-cadherin和 Vinmentin蛋白高表达,侵袭迁移能力增强
    4.讨论
    5.结论
第二部分 :对HBx过表达HepG2 细胞与对照组细胞高通量测序筛选目的基因,关联分析预测并验证
    6 前言
    7 材料与方法
        7.1 主要实验材料和仪器
            7.1.1 主要试剂
            7.1.2 主要实验仪器
        7.2 研究对象和分组
        7.3 研究方法
            7.3.1 细胞复苏
            7.3.2 细胞传代
            7.3.3 细胞冻存
            7.3.4 RNA样品检测
            7.3.5 文库构建
            7.3.6 库检
            7.3.7 上机测序
            7.3.8 测序数据质量评估
            7.3.9 对比分析
            7.3.10 CircRNA鉴定
            7.3.11 CircRNA定量分析
            7.3.12 CircRNA差异分析
            7.3.13 ceRNA关联分析
            7.3.14 实时荧光定量PCR
            7.3.15 TA克隆测序
            7.3.16 FISH实验
            7.3.17 双荧光素酶报告基因实验
            7.3.18 统计学处理
    8 结果
        8.1 CircCYP24A1在HBx过表达组表达明显升高,且与miR-506和Snail2 可能存在ceRNA调节机制
    9 讨论
    10 结论
第三部分 :在HBx诱导肝细胞癌上皮-间质转化过程中,circCYP24A1 发挥的作用机制研究
    11 前言
    12 材料和方法
        12.1 主要试剂和仪器
            12.1.1 主要试剂
            12.1.2 主要仪器
        12.2 研究细胞
        12.3 研究方法
            12.3.1 细胞复苏
            12.3.2 细胞传代
            12.3.3 细胞冻存
            12.3.4 RNA干扰载体构建
            12.3.5 慢病毒转染
            12.3.6 稳转株筛选
            12.3.7 过表达载体构建
            12.3.8 过表达质粒转染
            12.3.9 实时荧光定量PCR
            12.3.10 细胞染色
            12.3.11 Western Bolt
            12.3.12 Transwell侵袭实验
            12.3.13 统计学处理
    13 结果
        13.1 在HBx过表达细胞中,干扰circCYP24A1 表达,上皮-间质转化程度下降
        13.2 Hep G2 细胞过表达circCYP24A1,上皮-间质转化程度增强,侵袭转移能力增强
    14 讨论
    15 结论
本研究创新性自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
在学期间科研成绩
致谢
个人简介



本文编号：3796478