LDHB对肿瘤及相应正常细胞增殖能力的影响

发布时间：2023-05-20 00:05

　　目的:肿瘤严重危害人类生命健康,能量代谢异常是肿瘤的特征性病理变化之一。有研究表明,肿瘤细胞即使在有氧的情况下,也选择糖酵解的方式进行糖的代谢以提供能量(即著名的瓦伯格效应)。这种有氧糖酵解最终将导致肿瘤细胞微环境中乳酸水平的增加,并在肿瘤侵袭、迁移、免疫逃逸等方面发挥重要作用。但是肿瘤微环境中乳酸水平增高对微环境中肿瘤细胞,尤其是相应正常细胞的影响及其机制,尚不十分清楚。我们推测上述乳酸水平增高不仅有助于肿瘤细胞的增殖,同时还将胁迫肿瘤细胞周围正常细胞改变自身的能量代谢方式,通过上调LDHB表达,发生类肿瘤样能量代谢方式的变化。比较LDHB在不同肿瘤细胞和相应正常细胞之间的表达;探讨LDHB对不同肿瘤细胞和正常细胞增殖能力的影响。对抗或抑制LDHB基因表达将抑制正常细胞代谢发生异常,有望成为抗肿瘤作用的新靶点。本文以LDHB为靶点,结合基因敲除和基因过表达技术,对乳酸对肿瘤及相应正常细胞增殖的作用,以及与LDHB间的关系进行了较为系统的研究,力图探索肿瘤发生的新机制,为寻找抗肿瘤药物作用的新靶点和抗肿瘤新药研发提供理论依据。方法:Western blot检测不同肿瘤细胞和正常细胞之间...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 Warburg效应与肿瘤能量代谢
    1.2 乳酸的促肿瘤作用
    1.3 LDHB与肿瘤
    1.4 目的及意义
第2章 实验材料
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 试剂与耗材
        2.1.3 主要试剂配制
    2.2 主要仪器
第3章 实验方法
    3.1 MDA-MB-231、HepG2、HGC-27、MCF-10A、L02、GES-1 细胞的培养
    3.2 乳酸处理MCF-10A、L02、GES-1 细胞
    3.3 稳定细胞株的构建
        3.3.1 质粒转化
        3.3.2 质粒提取
        3.3.3 转染
    3.4 G148筛选
    3.5 瞬时转染
    3.6 MTT检测
    3.7 EDU实验
    3.8 Western blot实验
    3.9 划痕实验
    3.10 统计分析
第4章 实验结果
    4.1 LDHB在正常细胞和肿瘤细胞中蛋白表达水平的差异
    4.2 LDHB高表达的肿瘤细胞,乳酸对其活力的影响
    4.3 肿瘤细胞敲低LDHB后乳酸对其细胞活力的影响
        4.3.1 肿瘤细胞敲低LDHB的验证
        4.3.2 乳酸对敲低LDHB的肿瘤细胞活力的影响
    4.4 LDHB低表达的正常细胞,乳酸对其活力的影响
    4.5 正常细胞过表达LDHB后乳酸对其细胞活力的影响
        4.5.1 正常细胞过表达LDHB的验证
        4.5.2 乳酸对过表达LDHB正常细胞活力的影响
    4.6 乳酸对正常细胞LDHB蛋白水平的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
文献综述
    参考文献
硕士期间发表的论文
致谢



本文编号：3820151