CXCR4在EBV相关胃癌中的表达和调控作用研究

发布时间：2023-06-10 14:46

　　EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一种双链DNA病毒,与多种肿瘤的发生相关。约有90%以上的健康人群在幼儿时期曾感染EBV,呈持续性潜伏感染状态,且在其体内均可检测到EBV抗体。EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinoma,EBVaGC)约占胃癌总数的3%-8%,临床病理学特征与其他胃癌不同,其发病机制尚未明了。CXCR4属于高度保守的7次跨膜G蛋白偶联受体,已有研究发现CXCR4在多种肿瘤组织中表达升高,可影响多种肿瘤的发生发展过程,如促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、诱导细胞迁移和侵袭以及上皮间质转化等多种生物学活性。CXCR4与病毒感染密切相关,如CXCR4可作为共受体辅助HIV感染并进入宿主细胞。CXCL12可与CXCR4的N端特异性结合,并与CXCR4的第2胞外环相互作用后启动下游信号通路,调控相关肿瘤的发生和发展。目的:明确CXCR4在EBVaGC组织中的表达及其调控机制,并探讨CXCR4在EBVaGC发生发展中的作用以及可能的作用机制,为进一步阐明EBV在EBVaGC发生发展过程中的作用提供理论基础。材料和方法:(1)...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
材料与方法
    1.1 仪器、试剂和耗材
        1.1.1 主要仪器
        1.1.2 主要试剂和耗材
        1.1.3 常用试剂配制
    1.2 细胞系及胃癌组织标本的选择
        1.2.1 细胞系的选择
        1.2.2 胃癌组织标本的选择
    1.3 细胞处理
        1.3.1 实验前准备
        1.3.2 细胞复苏
        1.3.3 培养液的更换
        1.3.4 细胞传代
    1.4 CXCR4 及相关基因m RNA检测
        1.4.1 细胞系RNA提取
        1.4.2 cDNA合成
        1.4.3 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)
        1.4.4 microRNA逆转录
        1.4.5 microRNA表达水平检测
        1.4.6 Real-time qPCR结果数据分析
    1.5 CXCR4及相关蛋白检测
        1.5.1 细胞系总蛋白的提取
        1.5.2 蛋白浓度的测量
        1.5.3 Western blott 检测细胞系中蛋白的表达
        1.5.4 PI3K通路抑制剂LY294002作用后检测蛋白表达变化
        1.5.5 免疫组织化学染色(SP法)检测胃癌组织中CXCR4 蛋白的表达
        1.5.6 免疫荧光检测胃癌细胞中蛋白亚定位
    1.6 CXCR4甲基化状态检测
        1.6.1 细胞系DNA提取
        1.6.2 DNA样本的焦亚硫酸盐修饰
        1.6.3 亚硫酸盐基因组测序
    1.7 细胞转染
        1.7.1 LMP1 和 LMP2A 过表达细胞模型的建立
        1.7.2 siRNA转染
    1.8 细胞生物学表型实验的检测
        1.8.1 细胞凋亡实验
        1.8.2 细胞周期实验检测
    1.9 细胞自噬的检测
        1.9.1 透射电镜检测自噬体的形成
        1.9.2 共聚焦显微镜检测自噬体的形成
    1.10 统计学和图像分析
结果
    2.1 GSE51575 数据集中CXCR4 的转录表达
    2.2 胃癌细胞系中CXCR4及相关基因的转录表达
    2.3 胃癌细胞系及组织中 CXCR4 蛋白表达
    2.4 CXCR4 启动子和第 1 外显子甲基化状态检测结果
    2.5 LMP1对CXCR4 表达的调控作用
    2.6 EBV相关胃癌细胞中microRNA-146a的转录表达
    2.7 microRNA-146a潜在靶基因的预测
    2.8 microRNA-146a对 CXCR4 表达的调控作用
    2.9 AGS 和 AGS-EBV 细胞系中 PI3K/AKT 表达
    2.10 LY294002 通路抑制剂作用后CXCR4 蛋白表达变化
    2.11 LMP2A对 CXCR4 表达的调控作用
    2.12 CXCR4蛋白对细胞自噬的调控作用
    2.13 CXCR4对细胞凋亡和周期的影响
    2.14 CXCR4 和自噬在EBV潜伏期的作用
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录或缩略词表
致谢



本文编号：3833054