以NOX4为靶点抗M2巨噬细胞促进NSCLC增殖的研究

发布时间：2024-01-08 18:41

　　目的:M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的渗透促进恶性肿瘤的恶性进展。然而,肿瘤细胞控制巨噬细胞募集和M2极化的机制在很大程度上尚不清楚。NADPH氧化酶4(NOX4)在非小细胞肺癌(NSCLC)中大量表达,并介导恶性肿瘤进展。NOX家族与肿瘤相关的炎症密切相关,然而,肿瘤NOX是否影响微环境巨噬细胞尚不明确。NOX4抑制剂GKT137831由于其低毒性,目前用于治疗特发性肺纤维化、糖尿病肾病、原发性胆源性胆管炎已进入临床试验,本研究将探究其用于非小细胞肺癌治疗的疗效,为扩展临床适应症提供依据。方法:(1)使用免疫组织化学染色法检测临床标本NOX4、CD206以及CD68的表达情况;(2)使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巨噬细胞IL-10、IL-12以及IL-23的表达情况以及磷酸化JNK(T183/Y185)、总JNK的水平,检测非小细胞肺癌细胞CCL7,IL8,CSF-1以及VEGF-C的表达情况;(3)使用免疫荧光技术检测细胞外过氧化氢的水平;(4)使用蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测非小细胞肺癌细胞NOX4、beta-Tubulin的表达情况,检测巨...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
第一章 非小细胞肺癌高水平的NOX4与巨噬细胞趋化性和M2型巨噬细胞标志物的临床相关性
    前言
    1.1 材料与仪器
        1.1.1 主要仪器
        1.1.2 主要试剂和耗材
    1.2 实验方法
        1.2.1 GSEA分析
        1.2.2 临床标本免疫组织化学(IHC)染色
        1.2.3 染色标本的统计分析
    1.3 实验结果
    1.4 讨论与小结
第二章 NOX4促进巨噬细胞迁移和M2型极化
    前言
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂和耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞转染
        2.2.3 条件培养基(Conditioned Medium,CM)的制备
        2.2.4 巨噬细胞趋化实验(Transwell)
        2.2.5 集落结晶紫染色
        2.2.6 免疫印迹试验(Western Blotting)
        2.2.7 酶联免疫吸附试验
        2.2.8 统计学方法
    2.3 实验结果
    2.4 讨论与小结
第三章 NOX4 通过ROS/ PI3K信号传导诱导非小细胞肺癌细胞产生多种细胞因子从而促进巨噬细胞迁移和M2型极化
    前言
    3.1 材料与仪器
        3.1.1 主要仪器
        3.1.2 主要试剂和耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 条件培养基(Conditioned Medium,CM)的制备
        3.2.3 巨噬细胞趋化实验(Transwell)
        3.2.4 集落结晶紫染色
        3.2.5 免疫印迹试验(Western Blotting)
        3.2.6 酶联免疫吸附试验
        3.2.7 细胞外过氧化氢的测定
        3.2.8 人细胞因子抗体芯片检测
        3.2.9 统计学方法
    3.3 实验结果
    3.4 讨论与小结
第四章 肿瘤NOX4 诱导巨噬细胞分泌HB-EGF介导非小细胞肺癌细胞体外增殖
    前言
    4.1 材料与仪器
        4.1.1 主要仪器
        4.1.2 主要试剂和和耗材
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞的培养
        4.2.2 细胞增殖的评估与集落形成试验
        4.2.3 酶联免疫吸附试验
        4.2.4 统计学方法
    4.3 实验结果
    4.4 讨论与小结
第五章 NOX4增强M2型极化巨噬细胞的渗透并诱导非小细胞肺癌细胞体内增殖
    前言
    5.1 材料与仪器
        5.1.1 主要仪器
        5.1.2 主要试剂和和耗材
    5.2 实验方法
        5.2.1 异种移植肿瘤模型的构建
        5.2.2 流式细胞仪测定异种移植 A549 肿瘤组织的 F4/80 和 CD206 的表达情况
        5.2.3 细胞的培养
        5.2.4 统计学方法
    5.3 实验结果
    5.4 讨论与小结
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
主要英文缩略语索引
致谢



本文编号：3877461