拟康氏木霉胞外多糖对CT26结肠癌移植瘤小鼠抑瘤作用的研究

发布时间：2017-05-25 03:11

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【摘要】：目的:研究拟康氏木霉胞外多糖对CT26结肠癌移植瘤小鼠抑瘤作用及其相关机制。方法:1.采用MTT法检测拟康氏木霉胞外多糖(EPS)对小鼠结肠癌CT26细胞存活率的影响,以不同浓度EPS处理CT26细胞24 h后检测。2.PBS稀释处于对数生长期的CT26细胞,使其密度为2×106个/ml。75%酒精对小鼠右下腋进行消毒擦拭,腋下接种0.2 ml/只,每日观察小鼠右腋,待其出现绿豆粒大小肿块,说明移植瘤模型建立成功。3.通过治疗给药途径研究EPS对CT26荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。以CT26结肠癌移植瘤小鼠为模型,检测拟康氏木霉胞外多糖对小鼠CT26移植瘤的抑制作用和生理指标的影响。4.通过联合应用5-氟尿嘧啶(5-Fu)研究拟康氏木霉胞外多糖联合化疗药物对CT26结肠癌小鼠的抗肿瘤作用。以CT26结肠癌移植瘤小鼠为模型,检测联合用药对小鼠CT26移植瘤的抑制作用和生理指标的影响。5.小鼠血液样本于10000 rpm离心,取血清,ELISA法测定小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度。6.制备小鼠脾细胞悬液并分别与刀豆蛋白A(Con A)或脂多糖(LPS)孵育48h,酶标仪570nm波长读取每孔OD值。7.制备小鼠脾细胞悬液避光4o C与CD3和CD8a荧光抗体孵育30分钟,流式细胞仪检测CD3+CD8+T淋巴细胞占脾细胞比例。8.肿瘤组织块经组织裂解提取组织蛋白用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和P53的表达。9.小鼠的血液样本送检,测小鼠血常规参数的变化。结果:1.MTT法检测发现EPS在50~1000μg/ml剂量范围内对CT26细胞无明显细胞毒性。2.EPS给药具有显著的体内抗肿瘤作用,且EPS给药组小鼠免疫器官指数明显上升,生存质量明显提高。3.酶联免疫吸附实验结果显示EPS给药明显提高小鼠血清中IL-2与TNF-α水平。4.无有丝分裂刺激的淋巴细胞增殖实验中,EPS给药组小鼠脾淋巴细胞增殖率明显高于肿瘤模型组并呈剂量依赖性,在刀豆蛋白A(Con A,5μg/m L)或LPS(10μg/m L)刺激下,EPS组小鼠的脾淋巴细胞增殖率明显较肿瘤模型组高,但5-Fu组淋巴细胞增殖率显著降低。5.EPS给药提升了小鼠CD3+CD8+T细胞的比例。6.治疗给药途径中,Western blotting结果显示EPS给药可以调节小鼠体内肿瘤组织凋亡相关蛋白的表达,提示EPS给药可能诱导小鼠肿瘤细胞凋亡,具体分子机制有待进一步研究。7.联合给药实验中,EPS联合5-Fu明显改善了小鼠各项生理指标、血液学参数与生存质量。结论:1.EPS给药可以提高小鼠机体免疫力,激活机体免疫系统发挥机体免疫抗肿瘤作用。2.EPS联用5-Fu对治疗小鼠结肠癌肿瘤具有协同与增效解毒作用。
【关键词】：拟康氏木霉 胞外多糖 免疫调节 抗肿瘤 结肠癌
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-19
• 研究内容与方法19-33
• 1. 研究内容19-20
• 2. 材料与方法20-33
• 结果33-46
• 讨论46-52
• 结论52-53
• 参考文献53-59
• 综述59-73
• 参考文献66-73
• 作者简介及读研期间主要科研成果73-74
• 致谢74

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本文编号：392590