氧化型ATM-EMR-Acetyl-CoA/SIRT1信号轴促三阴性乳腺癌干细胞富集和干性维持研究

发布时间：2024-04-20 02:24

　　目的:揭示氧化型ATM在低氧三阴性乳腺癌干细胞(TNBC-CSCs)富集和干性维持中的作用及分子机制。方法:(1)流式细胞术对比分析常氧和低氧培养条件下,低氧对三阴性乳腺癌(TNBC)Hs578T和BT549细胞中CD44⁺/CD24^-的干细胞样细胞的比例影响;乳腺癌干细胞微球体(mammospheres)形成实验对比分析常氧和低氧培养条件下,低氧对干细胞微球体形成能力的影响;qRT-PCR和Western blot检测富集得到的干细胞微球体CSCs标志物的表达情况。(2)Western blot检测常氧和低氧条件下干细胞微球体形成实验富集得到的干细胞微球体中ATM、p-ATM(s1981)和γH2AX(s139)蛋白表达量;qRT-PCR和Western blot分析ATM特异抑制剂KU60019处理、shRNA稳定敲低ATM表达,对TNBC-CSCs富集和干性标志物表达的影响。(3)2DG、二甲双胍分别或联合处理低氧TNBC-CSCs,应用ATM检测试剂盒检测ATP产量。ATM特异抑制剂KU60019处理或未处理低氧培养的TNBC-CSC...

【文章页数】：140 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.1流式细胞术检测低氧处理24h后Hs578T和BT549干细胞群

重庆医科大学博士研究生学位论文2结果2.1低氧增加三阴性乳腺癌细胞株中CD44+/CD24-干细胞群比例为明确低氧是否对三阴性乳腺癌干细胞特征具有调控作用，我们首先利用干乳腺肿瘤干细胞表面分子标志CD44+/CD24-，使用流式细胞检测常氧或低氧处理24h后的TNBC....

图1.2低氧促进TNBC-CSCs干细胞微球体形成并上调干性标志物的mRNA和蛋白表达(A)RepresentativeimagesofmammospheresformedfromHs578TandBT549cellsculturedunder1%O2condition.Scalebar,100μm.ThequantificationofmammosphereformingefficienciesofbothHs578TandBT549cellswereshown(rightpanel,**P<0.01).(B,C)

重庆医科大学博士研究生学位论文检测常氧和低氧条件下培养的干细胞微球体干细胞标志物SOX2、OCT4、KLF4及c-MYC的表达水平。结果显示，低氧条件下培养的乳腺癌干细胞微球体中，干细胞标志物的mRNA和蛋白表达水平均显著高于常氧条件下培养的干细胞微球体（图1.2B....

图2.1蛋白印迹检测三阴性乳腺癌干细胞中ATM氧化激活

图2.1蛋白印迹检测三阴性乳腺癌干细胞中AesternblottingtochecktheoxidizedATMactivhypoxia.ATM促进TNBC-CSCs富集是一种常用的ATM激酶特异性抑制剂，研究氧化型ATM对TNBC-CSC....

图2.2氧化型ATM促进TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578TandBT549cellsinadose-dependentmanner.Scalebar,500μm.Hs578TandBT549cellsweresuspensioncultureinCSCspecialmediumunder

39图2.2氧化型ATM促进TNBC-CSCs富集Figure2.2OxidizedATMpromotesTNBC-CSCsenrichment.(A)KU60019suppressesmammosphereenrichmentofHs578T....

本文编号：3958730