乳酸通过beclin1诱导肺癌细胞线粒体自噬的分子机制研究

发布时间：2024-06-29 18:21

　　目的:代谢适应性对于肿瘤的进展至关重要,Warburg效应中癌细胞优先利用乳酸而不是葡萄糖产能时,会模拟葡萄糖饥饿造成细胞自噬的发生。然而,乳酸在细胞自噬的诱导中是否发挥作用仍不清楚,因此,本文主要探讨乳酸对细胞自噬的作用及分子机制。材料与方法:选取人肺癌细胞A549、H1299和H1688细胞作为研究对象。(1)通过Western blot探究乳酸在诱导细胞自噬中beclin1、p62和LC3蛋白表达量的变化;(2)通过两种自噬抑制剂3-MA和HCQ探究是否能逆转乳酸诱导的自噬;(3)通过免疫荧光分析自噬体的形成;(4)通过转染beclin1 cDNA和beclin1siRNA,探究乳酸是否通过beclin1诱导细胞自噬;(5)通过双荧光素酶报告基因实验和CHX半衰期实验,探究乳酸在转录前还是转录后调控beclin1蛋白表达;(6)通过转染E3泛素连接酶NEDD4和CO-IP实验,Western blot检测beclin1的蛋白量;(7)通过解偶联剂FCCP和乳酸联用,Western blot检测线粒体自噬相关蛋白parkin、beclin1、LC3蛋白表达量;(8)转染beclin...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.4.1不同浓度乳酸对细胞自噬的影响

皖南医学院硕士学位论文22结果1实验结果1.1Westernblot检测外源乳酸处理对肺癌细胞自噬相关蛋白表达水平的作用Westernblot结果显示，在A549、H1299、H1688细胞中加入不同浓度的乳酸，随着乳酸浓度的增加，自噬相关蛋白beclin1和LC3表达量均上升，....

图1.4.2自噬抑制剂3-MA和HCQ可逆转乳酸诱导的自噬

皖南医学院硕士学位论文22结果1实验结果1.1Westernblot检测外源乳酸处理对肺癌细胞自噬相关蛋白表达水平的作用Westernblot结果显示，在A549、H1299、H1688细胞中加入不同浓度的乳酸，随着乳酸浓度的增加，自噬相关蛋白beclin1和LC3表达量均上升，....

图1.4.3免疫荧光检测乳酸诱导的自噬流

皖南医学院硕士学位论文231.3mCherry-GFP-LC3双标检测乳酸处理下自噬流的变化在A549细胞中，转染mCherry-GFP-LC3双标质粒，并在转染的基础上加入10mM乳酸，雷帕霉素作为阳性对照，共聚焦显微镜下观察自噬体的形成。免疫荧光结果显示，与对照组相比，雷帕霉....

图1.4.4乳酸通过beclin1诱导自噬

皖南医学院硕士学位论文24图1.4.4乳酸通过beclin1诱导自噬1.5Westernblot检测乳酸通过MCT1进入细胞调控beclin1的表达Westernblot结果显示，与对照组比，乳酸处理后beclin1表达水平增加，联用CHC后，beclin1表达水平降低。图1.4....

本文编号：3997834