一种新的咪唑通过AMPK/mTOR途径诱导肿瘤细胞自噬

发布时间：2024-07-06 00:20

　　自噬与肿瘤的发生有着密切的关系.通过防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累,自噬限制氧化应激、慢性组织损伤和致癌信号传导,抑制癌症的发生,这表明了自噬激活在癌症预防和治疗中的作用.研究发现一种新的咪唑,命名为NO.143.利用胰腺癌细胞PANC-1为模型,用MTS检测不同浓度NO.143对细胞活力的影响,共聚焦显微镜观察自噬荧光点,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、ATG13、p62的表达情况,以及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况.结果表明,NO.143呈现浓度依赖性地抑制肿瘤细胞的增殖. NO.143能够明显增加细胞中自噬荧光斑点、LC3B表达、ATG13的含量和p62的降解,表明NO.143能够显著上调肿瘤细胞的自噬.进一步研究显示,NO.143能够增加AMPKα的磷酸化水平,降低哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和S6的磷酸化水平.相反的,在抑制AMPKα活性后,这种现象发生逆转.这些结果都可能表明NO.143通过AMPK/mTOR信号传导途径诱导肿瘤自噬,抑制肿瘤细胞的增殖.

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【部分图文】：

图1NO.143的结构

自噬相关基因(Atg)控制自噬过程[9-10].这些Atg基因的产物受到哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR,能量敏感因子AMPK和缺氧诱导因子HIFs传感机制的影响打开和关闭[11-12].自噬的分子机制复杂且高度保守.目前,已发现mTOR信号传导途径和磷酸肌醇-3-激酶途径....

图2NO.143对肿瘤细胞增殖的影响

使用Origin8软件进行统计.获得至少3次独立实验的所有数据,并表示为平均值±标准偏差(S.D.).使用单因素方差分析(ANOVA)分析数据以确定不同组之间的显著差异.P值<0.05被认为具有统计学意义.3结果与讨论

图310μmol/L的NO.143处理PANC-1细胞8h后细胞内荧光自噬斑点的变化

自噬发生时,LC3会参与自噬体的形成,用表达GFP-LC3的质粒转染PANC-1细胞并监测自噬体的形成.对照组和NO.143治疗组,在PANC-1细胞中都可检测到典型的GFP-LC3阳性结构.NO.143处理组的荧光自噬斑点远远多于对照组(图3).免疫印迹分析揭示了在PAN....

图5mTOR信号通路中不同蛋白表达量的变化

如图5所示,与空白对照组相比,用NO.143处理的细胞中磷酸化的AMPKα含量在短时间内显著增加,8h后恢复到正常水平.作为AMPKα的下游靶蛋白,随着磷酸化AMPKα的增加,mTOR的磷酸化水平也显著降低.同时,mTOR下游蛋白的S6和4ebp1的磷酸化水平也被显著抑制(....

本文编号：4001775