SOCS3通过EGFR/c-erbB-2通路上调ER表达的实验研究

发布时间：2025-04-22 22:04

　　目的：探讨乳腺癌非激素依赖型逆转为激素依赖型的机制途径,为临床上治疗非激素依赖性乳腺癌提供理论依据。方法：(1)将外源性SOCS3基因通过慢病毒转染法入导入非激素依赖型乳腺癌MDA-MB-231细胞,构建SOCS3稳转乳腺癌细胞株,RT-PCR和免疫荧光检测细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达。(2)集落形成实验、MTT法观察外源性SOCS3基因对乳腺癌细胞生长的影响。(3)细胞粘附实验、划痕实验和Boyden Chamber法观察SOCS3基因对乳腺癌细胞粘附、迁移和侵袭能力的影响。(4)Western blot法检测SOCS3对STAT3、Akt信号分子活性的影响及细胞周期蛋白(cyclinD1、p21)的表达变化；RT-PCR和Western blot分析检测SOCS3对MAPK、c-fos、c-jun表达的影响。(5)用他莫昔芬治疗携带SOCS3基因的乳腺癌细胞株,并和未携带SOCS3基因的乳腺癌细胞株进行生长速度、细胞凋亡等比较。结果：(1)构建了稳定的SOCS3转染细胞模型；(2)SOCS3过表达细胞生长速度比正常细胞慢,具有显著性差异；(3)SOCS3过表达细胞的粘附、迁移...

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
引言
第一章 绪论
    1.1 乳腺癌简介
        1.1.1 乳腺癌的特征
        1.1.2 乳腺癌的治疗方法
        1.1.3 乳腺癌内分泌治疗简介
        1.1.4 乳腺癌耐药性简介
    1.2 他莫昔芬简介
    1.3 SOCS家族及SOCS3简介
    1.4 SOCS3抑制细胞因子信号的分子机制
第二章 理论分析
    2.1 乳腺癌内分泌治疗产生耐药性的机制分析
    2.2 SOCS3在疾病中的作用
        2.2.1 SOCS3在炎症疾病中的作用
        2.2.2 SOCS3在肥胖病中的作用
        2.2.3 SOCS3在病毒感染性疾病中的作用
        2.2.4 SOCS3与生殖的关系
    2.3 SOCS3在恶性肿瘤中的作用
    2.4 构建SOCS3过表达细胞株理论研究
        2.4.1 慢病毒法构建SOCS3过表达细胞株
        2.4.2 SOCS3过表达细胞株筛选(双重筛选)
        2.4.3 SOCS3过表达细胞株培养
    2.5 相关实验原理
        2.5.1 细胞集落(克隆)形成实验
        2.5.2 MTT实验
        2.5.3 RT-PCR实验
        2.5.4 蛋白免疫印记法(western blot)
        2.5.5 细胞粘附实验
        2.5.6 细胞迁移(划痕)实验
        2.5.7 细胞侵袭(Boyden Chamber)实验
第三章 实验研究
    3.1 材料
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 样本信息
        3.1.3 仪器设备
        3.1.4 试剂及耗材
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 SOCS3过表达乳腺癌细胞株的建立
        3.2.3 MTT检测
        3.2.4 细胞克隆形成率检测
        3.2.5 细胞粘附
        3.2.6 细胞迁移(划痕实验)
        3.2.7 细胞侵袭
        3.2.8 荧光定量PCR检测相关基因mRNA水平变化
        3.2.9 免疫印迹检测相关基因蛋白水平变化
第四章 数据处理与结果
    4.1 细胞培养
    4.2 SOCS3过表达乳腺癌细胞株的建立
    4.3 细胞增殖的MTT检测
    4.4 细胞克隆形成能力检测结果
    4.5 细胞粘附实验结果
    4.6 细胞迁移(划痕实验)结果
    4.7 细胞侵袭结果
    4.8 荧光定量PCR检测细胞相关基因MRNA的水平变化
    4.9 WESTERN BLOT检测细胞相关基因蛋白水平的变化
    4.10 讨论
第五章 结论
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表的论文
附录B 其它需要说明的内容



本文编号：4040780