EPO通过Akt通路促进胶质母细胞瘤体外快速增殖的作用研究

发布时间：2017-06-08 07:03

  本文关键词：EPO通过Akt通路促进胶质母细胞瘤体外快速增殖的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本研究拟通过胶质母细胞瘤的体外实验,研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是否存在促进胶质母细胞瘤快速增殖的作用,并探讨AKT信号通路和细胞周期关键蛋白CyclinD1表达的调节是否为其关键的作用靶点。方法本研究采用胶质母细胞瘤U87细胞株,在体外成功培养后分为对照组、EPO处理组及EPO+蛋白激酶B(Protein Kinase B,Akt)抑制剂组。EPO处理组:在U87细胞的培养基中加入EPO(0.1U/ml)处理7天;对照组:用等体积PBS替代EPO;EPO+Akt抑制剂组:U87细胞的培养基中同时加入EPO(0.1U/ml)及Akt抑制剂(81.3μM)共处理7天。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测生长曲线、细胞倍增时间和克隆形成检测各组细胞增殖速度,通过以上检测EPO对胶质母细胞瘤U87细胞株增殖的影响;采用反转录聚合酶链反应PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blotting,WB)和细胞免疫荧光法(immunofluorescence,IF)测定CyclinD1的mRNA和蛋白质表达变化,通过以上检测EPO对胶质母细胞瘤中细胞周期关键蛋白CyclinD1表达的影响;采用流式细胞仪检测EPO对胶质母细胞瘤U87细胞株细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比,EPO处理组中U87细胞生长速度明显增快(P生长曲线3天/5天/7天=0.020/0.028/0.007,P倍增时间=0.0269,P克隆形成=0.0010),细胞中CyclinD1 mRNA及蛋白的表达水平均较对照组明显升高(PRT-PCR=0.0186,P P-Akt=0.0020,Pβ-Cantenin=0.0026,P CyclinD1=0.0022,PIF=0.0099),流式细胞仪检测发现U87细胞的增殖指数也明显升高(P=0.0028);与EPO处理组相比,EPO+Akt抑制剂组细胞CyclinD1 mRNA及蛋白的表达水平明显降低(PRT-PCR=0.0029,P P-Akt0.0001,Pβ-Cantenin=0.0003,P CyclinD10.0001,PIF=0.0007),细胞增殖指数则有显著下降(P=0.0036),同时细胞增殖能力和速度较EPO处理组显著降低(P生长曲线3天/5天/7天=0.000/0.001/0.000,P倍增时间=0.0010,P克隆形成=0.0017)。结论本研究发现EPO可显著促进胶质母细胞瘤的体外增殖,上调细胞周期关键蛋白CyclinD1的表达,加快细胞增殖周期可能是重要的分子机制。
【关键词】：EPO 胶质母细胞瘤 细胞周期 增殖 蛋白激酶B抑制剂
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-15
• 参考文献12-15
• 第一部分 促红细胞生成素在胶质母细胞瘤细胞快速增殖中的作用研究15-30
• 1 材料与方法15-22
• 2 结果22-25
• 3 讨论25-27
• 4 小结27-28
• 参考文献28-30
• 第二部分EPO通过Akt通路调节Cyclin D1表达促进胶质母细胞瘤体外快速增殖的研究30-51
• 1 材料与方法31-39
• 2 结果39-46
• 3 讨论46-47
• 4 小结47-48
• 参考文献48-51
• 全文总结51-53
• 文献综述：促红细胞生成素在肿瘤发展中的相关研究53-60
• 参考文献56-60
• 致谢60-61
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录61

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