下调XIAP对胃癌细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响

发布时间：2017-06-25 09:19

  本文关键词：下调XIAP对胃癌细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：前期研究发现miR-30a-5p在胃癌细胞株中低表达,并初步证实XIAP为miR-30a-5p的靶基因。本课题旨在探讨XIAP在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达情况,以及下调XIAP后对胃癌细胞凋亡、增殖和细胞周期的影响及其可能的作用机制。方法：收集54例胃癌患者的组织标本及其临床资料,用qRT-PCR法检测组织标本中XIAP mRNA的表达情况；以人正常胃黏膜上皮细胞GES-1为对照,采用qRT-PCR法和Western Blot检测胃癌细胞AGS、SGC-7901、MGC-803、BGC-823中XIAP mRNA和蛋白的表达情况。人工设计合成两对XIAP siRNA干扰序列瞬时转染以上5株细胞,以si-NC为对照,用同上方法检测XIAP mRNA和蛋白的表达水平及干扰效率。Annexin V/PI法、CCK8法及流式细胞术分别检测沉默XIAP后细胞凋亡、增殖及细胞周期的变化。结果：XIAP在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P0.001),且与免疫组化标记物Her-2的表达有相关性(P0.01)。在胃癌细胞株AGS、SGC-7901、 MGC-803、BGC-823中XIAP蛋白的表达均高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(P0.05),但在AGS细胞中XIAP mRNA的相对表达量低于GES-1。瞬时转染以上5株细胞后,XIAP mRNA和蛋白的表达均较阴性对照序列组(si-NC)降低(P0.05/P0.01),干扰效率显著。下调XIAP后可增加胃癌细胞的凋亡率,呈时间依赖性抑制胃癌细胞的增殖(P0.05/P0.01),并诱导G0/G1和(或)G2/M期细胞阻滞。结论：XIAP mRNA在胃癌组织中表达上调,且与免疫组化标记物Her-2的表达有相关性。XIAP蛋白在胃癌细胞株中表达上调,但与细胞内XIAPmRNA的表达水平有差异。下调XIAP后,可明显促进胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,诱导细胞发生G0/G1和(或)G2/M期细胞阻滞。
【关键词】：XIAP 胃癌 凋亡 细胞增殖 细胞周期
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 前言8-12
• 材料与方法12-24
• 1 材料12-13
• 1.1 组织标本12
• 1.2 细胞株12
• 1.3 主要试剂12
• 1.4 主要仪器12
• 1.5 主要溶液配制12-13
• 2 方法13-24
• 2.1 组织标本收取13-14
• 2.2 细胞培养14-15
• 2.3 细胞转染15-16
• 2.4 RNA提取和qRT-PCR反应16-18
• 2.5 Western Blot实验18-21
• 2.6 流式细胞术21-22
• 2.7 CCK-8实验22-23
• 2.8 统计学处理23-24
• 结果24-40
• 1 XIAP mRNA在胃癌组织中表达上调且与Her-2的表达有相关性24-26
• 2 XIAP mRNA和蛋白在胃癌细胞株中的表达具有差异性26-29
• 2.1 qRT-PCR检测XIAP mRNA表达量26-27
• 2.2 Western Blot检测XIAP蛋白表达量27-29
• 3 siRNA下调胃癌细胞XIAP的表达29-31
• 3.1 qRT-PCR观察转染效率29
• 3.2 Western Blot观察转染效率29-31
• 4 下调XIAP促进胃癌细胞凋亡31-32
• 5 下调XIAP抑制胃癌细胞增殖32-35
• 6 下调XIAP诱导细胞周期阻滞35-40
• 讨论40-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 中英文缩略词表53-55
• 附录55-65
• 附录1 主要试剂55-57
• 附录2 主要仪器57-58
• 附录3 胃癌组织标本入库登记表58-59
• 附录4 实验数据表格59-65
• 在学期间成果65-66
• 致谢66

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王廷超;胃癌患者为何年轻化?[J];解放军健康;2003年06期

2 许永杰;;胃癌年轻化与饮食因素[J];健康博览;1998年07期

3 高玉敏,胡月玲,辛志春,迟宝峰;心理因素及烟酒茶嗜好与胃癌关系的Meta分析[J];内蒙古医学院学报;2005年04期

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本文编号：481626